解析荧光定量PCR仪选择有哪些要点及误区

荧光定量PCR 因操作方便、运行速度快、实验结果准确，受到越来越多的分子生物学研究者青睐。在实验技术成熟的今天，也许对你来说，zui难得不是实验技术上的问题——而是选择哪一种荧光定量PCR仪，面对各种不同性能的产品，您又该如何选择呢？
首先建议大家走出认识荧光定量PCR的两个误区：
误区一：仪器通道越多越好
随着PCR技术的成熟运用，多重扩增越来越热闹，荧光定量PCR仪也不能幸免。从zui初ABI公司推出的单通道荧光定量PCR仪发展到如今各个厂家都推出4通道、5通道甚至6通道荧光定量PCR仪，眼花缭乱的选择让人无所适从，就有人一不小心走进了“通道越多越好”的误区。
在使用有些厂家5通道的荧光定量仪时，为了确保实验结果的精确性和准确性都要在实验中使用ROX（一种荧光染料）或专用的Reference dye ，这些荧光染料都必须单独使用一个检测通道。这样以来，真正能检测多重PCR荧光信号的有效通道只有4个，而且使用校正染料可能会增加后期的使用成本。有的荧光定量PCR的检测通道是只为自已厂家的专用的荧光染料或试剂开放的，有效检测通道也绝非像宣传资料中宣称的那么多。在购买前确认荧光定量PCR仪器的有效检测通道尤为重要，不能单单只听宣传。





1、 仪器的检测通量

荧光定量PCR仪主要有传统的96孔板式、创新的离心式等，每种设计都有它的独到之处但也都有无法避免的缺憾。



在荧光定量PCR仪的众多技术参数中，升降温速度也是厂家喜欢大力宣传的指标。更快的升降温，可以缩短反应进行的时间，而且缩短了可能的非特异性结合、反应的时间，提高PCR的特异性。为了更好的完成实验，各个厂家纷纷推出能快速运行的荧光定量PCR仪。例如ROCHE推出的Lightcycler2.0利用空气动力学原理，可在半小时左右完成30-40个循环。ABI的7500可以选配FAST模块拥有5°C/秒的升降温速度，可在40分钟左右完成30-40个循环。zui近eppendorf新推出的Mastercycler ep realplex4S 和2S的银质模块荧光定量PCR仪 ，升降温的速度可达到6℃/秒和4.5/秒，是目前同类产品中升降温速度zui快的荧光定量PCR 仪。一个在其他仪器上原本需要40—60分钟的PCR反应，eppendorf Mastercycler ep realplex4S 和2S (银质模块)只需运行28分钟——别小看这节约下来的几十分钟，一天下来就可以多运行好几轮了。
4、 灵活性