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慢病毒是当前zui热门的基因操作工具，其感染谱广，可有效地感染肿瘤细胞、神经元细胞、心肌细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而为基因功能的研究提供了更强有力的工具。然而仍有一部分细胞，尤其是原代细胞和悬浮细胞由于细胞特性，很难获得GX的感染效率。为了提高细胞的感染效率，我们常常选择多加病毒或使用Polybrene等助感染试剂，然而细胞状态却变差了，且增加感染效率并没有达到理解的效果，这是什么原因呢？
一、对慢病毒感染出现的问题进行原因分析
1. 细胞状态变差——细胞毒性
杂质：病毒溶液中残留的杂质蛋白、内毒素及宿主细胞DNA等是造成细胞毒性的主要因素。特别对于某些外源刺激敏感的细胞来说，严重时将导致细胞死亡。这是病毒感染细胞后，状态差异的主要原因。
过度感染：外源基因过度表达，会导致目的细胞本身正常新陈代谢失衡。这是有些细胞过感会死亡的主要原因。
2. 病毒加了不少，效果不理想，如何增加感染效率——了解影响慢病毒感染效率的因素
细胞膜的流动性
细胞膜表面受体的表达丰度
病毒与细胞的接触面积和接触几率
细胞膜与病毒外壳蛋白电荷的多少
2. 调整细胞状态，感染时使用对数期的细胞：增加细胞膜的流动性
4. 离心法，感染时将细胞培养板密封，用平角转子离心机1000g离心1h，再放回培养箱中正常培养：增加慢病毒与细胞的接触几率，但对细胞有一定的机械损伤，仪器要求高
6. 使用传统的助感染试剂，如Polybrene：中和细胞膜和病毒粒子之间的电荷排斥，但Polybrene本身就具有细胞毒性，部分细胞对Polybrene敏感，容易导致细胞状态变差、形态发生变化、甚至死亡。
三、特殊细胞慢病毒感染注意事项
1. 悬浮细胞
对于极难感染的细胞，可采用多次感染的方法，即感染一次后，重新加入新鲜病毒再次感染，可显著提升感染效率。但需要注意调整两次感染间细胞状态。
3. 传代能力较差的原代细胞、非分裂细胞
非分裂细胞：如神经元细胞，接种后不再增殖，需要按照100%的汇合度进行接种。
Q：慢病毒如何稀释？
Q：如何确定向细胞中加入慢病毒的zui佳时间？
A：这种情况是由于慢病毒对该细胞有一定的毒性作用，需要调整并降低感染的MOI值，并且在感染后4小时、8 小时、12 小时对细胞进行观察，若发现细胞状态变差时，则需要立刻对细胞进行换液操作，使用新鲜的完全培养液替换病毒感染培养液。
Q：如何提高慢病毒对细胞的感染效率？
