在与蛋白相关的检测中,zui关键的一步便是蛋白质的提取。在提取的过程中,我们要经常加入蛋白酶YZ剂以防止蛋白质的降解。另外在磷酸化蛋白的研究过程中,磷酸酶YZ剂也是必不可少的。
本文详细总结了常用的蛋白酶YZ剂PMSF、Leupeptin亮肽素、Aprotinin抑肽酶、Pepstatin胃蛋白酶YZ剂、EDTA-Na2等以及磷酸酶YZ剂NaF氟化钠、Na3VO4原矾酸钠、Beta-glycerophosphate甘油磷酸钠、Na2P2O4焦磷酸钠等的溶液配制、贮存液与工作液浓度及保存条件。
一、蛋白酶YZ剂
特性:丝氨酸蛋白酶YZ剂,如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶和凝血酶,也YZ半胱氨酸蛋白酶如木瓜蛋白酶。
分子量:174.2
特性:YZ丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶如胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、纤溶酶和组织蛋白酶B。
分子量:C20H38N6O4 ×1/2 H2SO4:475.6 C20H38N6O4 x 1/2 H2SO4 × H2O:493.6
特性:丝氨酸蛋白酶YZ剂,YZ纤维蛋白溶酶、激肽释放酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶的高活性。不YZ凝血酶或因子X。
分子量:6,512
特性:YZ天冬氨酸(酸)蛋白酶如胃蛋白酶、肾素、组织蛋白酶D、凝乳酶、许多微生物酸性蛋白酶
分子量:685.9
特性:金属蛋白酶YZ剂
分子量:372.24
NaF氟化钠
分子量:41.99
分子量:183.91
(1). 取0.183克的原矾酸钠溶解于10ml的双蒸水中,加酸调节PH至10(颜色变黄)。
(3). 室温冷却
(5). 重复(1)(2)(3)(4)直至溶液保持无色,并且pH稳定于10,分装100ul/管,每10ml裂解液加一管。
溶解性:溶于水
使用:贮存液100mM,工作浓度25mM。
Na2P2O4 焦磷酸钠
分子量:265.9
使用:贮存液100mM,工作浓度1-2 mM。