2.1.3 哺乳动物细胞胞质RNA的分离

冰冷的磷酸盐缓冲液NaClKClNa2HP04•7H20KH2PO4冰冷的裂解缓冲液： LTris-HClNaClMgCL2NkmidetP-40胎盘RNase YZ剂SDS蛋白酶 K酚氯 仿异戊醇乙酸钠 (DEPC 处理）无水乙醇乙醇乙酸钠DEPC处理的水

Beckman JS 4. 2 转子或其他类似设备

一 材料与设备
1) 冰冷的磷酸盐缓冲液 (PBS):137 mmol/L NaCl, 2.7 mmol/l KCl,4.3 mmol/l Na2 HP04•7 H20,1.4 mmoI/L KH2PO4pH7.3
2) 冰冷的裂解缓冲液：50 mmol/LTris-HCl,pH 8.0 l00 mmoL/L NaCl,5 mmoL/L MgCL2), 0.5%(V/V)NkmidetP-40 1000 U/ml 胎盘,RNase YZ剂 (如：RNasin) 及 1 mmol/LDTT，用 DEPC 处理的水配制，过滤CJ
3)20%SDS
4)20 mg/ml 蛋白酶 K
5) 酚：氯仿：异戊醇 (25:24:1)
6)3mol/L 乙酸钠 (DEPC 处理）pH 5.2
7) 无水乙醇
8)75% 乙醇/25%0.lmoL/L 乙酸钠，pH 5.2
9)DEPC 处理的水








收起 

1 ) 此方法一次可处理 2 X107 个细胞，每 107 个细胞可获得 30〜100ug  RNA 。其 A260/080 应该在 1. 7〜2 . 0 之间。
2 ) 第二步操作重悬细胞时要小心操作，避免起泡沫,, 待悬液迅速变清，则显示细胞裂解完成
3 ) 如果所收集的细胞转染过 DNA，可用无 RNase 的 DNase  I  消化去掉污染的DNA , 再按前述的方法用酚：氯仿：异戊醇及氯仿：异戊醇抽提回收 RNA 。