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从植物组织中分离高尔基体

实验材料

新鲜组织

试剂、试剂盒

匀浆介质

仪器、耗材

研钵和杵离心机

实验步骤

1. 先用剪刀大致剪切叶片或茎杆,然后在少量的介质中用刀片切成碎片。
2. 对于 1 g 新鲜组织,在 1 ml 介质中用研钵和杵捣碎使组织匀浆化。
匀浆介质:
50 mmol/L FiEPES
10 mmol/L KCI
1 mmol/L EDTA
10 mmol/L 抗坏血酸
0.1% BSA
5 mmol/L DTT,pH 7.5
0.4 蔗糖
3. 用单层的 Miracloth 挤压浓缩的匀浆液以除去没有破碎的细胞、细胞壁和细胞碎片。
4. 将匀浆液转移至 35 ml 或 50 ml 的离心管中。
5. 用吊桶式转头以 1000 g 离心 10 分钟来除去细胞核、淀粉和完整的叶绿体。
6. 将 1000 g (10分钟)的离心上清铺到不连续的蔗糖梯度上,梯度是在 35 ml 的管中用含有 4 ml 的 37% (w/v) 的蔗糖和 8 ml 21.5% 的蔗糖制备的。









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2016-04-03
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