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正常细胞常规核型标本制备_人淋巴细胞染色体标本制备

实验方法原理在淋巴母细胞分裂高峰时加入秋水仙素,破坏细胞纺锤体的形成,使细胞停止在分裂中期。然后收集细胞,低渗处理,使细胞胀大,染色体伸展。接着进行固定并除去中期分裂相中残存的蛋白质,使染色体清晰且分散良好。再结合离心技术去掉红细胞碎片,然后采用空气干燥法制片获得中期染色体标本。
实验材料

HeLa细胞

试剂、试剂盒

640培养液肝素溶液秋水仙素胰蛋白酶EDTAPHAKCl甲醇冰醋酸Giemsa原液磷酸缓冲液生理盐水

仪器、耗材

超净台镊子离心机水浴箱天平离心管显微镜载玻片平皿

实验步骤

1.  微量全血细胞培养至68小时左右,用1 ml 注射器号针头向每个5 ml 培养瓶内加2滴秋水仙素溶液。
2.  摇匀后继续培养3小时,此项操作不需要严格无菌。








 

10.  斜放载玻片,在空气中晾干(此期间配制Giemsa染液,Giemsa原液和磷酸缓冲液1:10)。


 

12.  低倍镜下,制片质量较好的标本上可看到有较多的分裂相,染色体之间分散良好,互不重叠。



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2016-04-03
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