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特殊细胞培养实验_一、二倍体细胞培养法

实验方法原理二倍体细胞来源体内二倍体细胞,也即正常细胞的初代培养。初代培养细胞成功后能始终保持二倍体细胞性状,便成为二倍体细胞培养。
二倍体细胞虽不难培养,但欲求长期呈旺盛地增殖生长、并保持二倍体细胞性状,亦非易事。为此必须采取一些有效的措施,一是低温冻存,二是妥善的培养方法。
用反复传代的方法以求获得大量细胞和维持细胞长期生存的办法是不妥的。因在反复传代中,难免由于培养条件的变化和其它不利影响,使细胞生物学性状发生变化。随时间延长不仅能导致细胞停止生长,并可失掉二倍体性状或发生转化。
实验材料

细胞

试剂、试剂盒

培养液BSS胰蛋白酶消化液

仪器、耗材

培养瓶

实验步骤

二倍体细胞培养方法与一般培养相同,关键在于传代,其传代程序为

1.  吸除旧培养液注入另瓶中;






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其他

一、要点
1.  采取以下措施可能利于二倍体细胞培养
(1)严格控制pH值,在5 %CO2温箱中培养;










二、讨论
如何能保留有大量可利用的二倍体细胞?首先在初代二倍体细胞培养时,要接种多量细胞;生长成功后立即冻存做为种细胞( Stock)。用于实验时,解冻1 分Stock,传1~3 代,按下式处理:




2016-04-05
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