| 实验步骤 | 一、材料仪器设备及试剂 1.材料:根系伤流液。 2.仪器设备:分光光度计,加热设备,试管,试管架,移液管,洗耳球。 3.试剂及配制:95﹪乙醇。 50μg· ml-1谷基酸氮标准母液:准确称取谷氨酸52.52 mg ,溶于100 ml 10﹪异丙醇溶液中。 3﹪水合茚三酮:称取水合茚三酮3g, 溶于100 ml 95﹪乙醇中。 二、实验步骤 1. 谷氨酸氮标准曲线制作 (1)取6支试管,编号,按下表配制每管含量为0~25μg的谷氨酸氮标准液。 加入表中试剂后,摇匀,置于沸水浴中准确加热10min,溶液变为蓝色,表示有氨基酸存在,取出后各管立即加入5 ml 95%乙醇,摇匀,冷却后以0号管溶液作空白对照,于520nm波长下测定吸光度(A)值。 (2)标准曲线绘制 以1~5号管谷氨酸氮含量为横坐标,吸光度(A)值为纵坐标,绘制标准曲线。 2. 伤流液中氨基酸含量的测定 取3支试管(三个重复),编号,各加入伤流液0.5 ml,蒸馏水1 ml,3﹪水合茚三酮溶液0.5 ml,摇匀,置于沸水浴中准确加热10min后,取出各管立即加入5 ml 95%乙醇,摇匀,冷却后以标准曲线0号管溶液作空白对照,于520nm波长下测定吸光度(A)值。 三、结果计算 根据样品管的吸光度值,从标准曲线上查出相应的谷氨酸氮含量,三个重复求平均值代入下列公式计算伤流液中氨基酸含量。 展开 |
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