单克隆抗体技术：细胞融合

实验概要

本文介绍了单克隆抗体技术——细胞融合实验的操作流程。

实验原理

细胞融合的方法有物理法，如电融合、激光融合，化学融合法和生物融合法，如仙台病毒，此处例举化学融合法中的一种即聚乙二醇融合法。
3调整），分子量小的PEG，融合效应差，又有毒性，分子量过大，则粘性太大，不易操作。50％浓度，pH偏碱时融合效应ZG。也有采用30%～50％浓度的PEG加上10％二甲亚砜。不同批号的PEG，即使分子量相同，但融合率却有明显差异，选用时必须注意。每批都必须进行细胞毒性试验后方可应用。要买高纯度的，一般选供气相色谱用的PEG。

主要试剂

1. 1640培养液100ml
3. 2.5％FCS－1640液50ml
5. 50％PEG：取分子量4 000，高纯度的（日本进口或Serva）PEG10g放入25ml瓶中高压灭菌，使用前用预热于40℃的1640液10ml等量（W/V）混合，以酚红检查pH，一般不必调pH。如pH有改变，可用HCl或NaHCO₃调整。

主要设备

1. 10ml和50ml的灭菌沉淀管或瓶

实验材料

供融合用的脾细胞及瘤细胞。

实验步骤

1. 准备好脾细胞。
8脾细胞和10⁷小鼠瘤细胞，并加入50ml 2.5％FCS－1640液。
4. 移去上清液。
6. 加预热至40℃的50％PEG 0.8ml，用1ml吸管缓慢滴加，边加边摇沉淀管，肉眼观察可见有颗粒出现，滴加过程要求持续2min。
8. 重复7一次。
10. 重复9一次。
12. 室温，400g离心1min，使细胞沉淀。
14. 往已于前一日种有饲养细胞的40孔塑料培养盘中滴加融合的细胞液，每孔1滴（约0.05ml）。
2饱和湿度的37℃温箱中培育。
17. 于第12、15日加入含有HAT的完全1640培养液。在每次换液前用倒置显微镜观察，大约在10天左右就可观察到杂交瘤细胞生长出来。大多数杂交瘤细胞在10~20天内出现，但也有在1个月左右才能出现的。杂交瘤细胞出现后，吸取上清液，检查抗体。

注意事项

1. 技术上的误差常常导致融合的失败。例如，供者淋巴细胞没有查到免疫应答。这必然要失败的。