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一、实验目的和内容
内容：1．用滤膜法检测大肠菌群。
二、实验材料和用具
微孔滤膜(孔径0.45µm)、滤器(容量500mL)、抽气设备、镊子、发酵用试管、杜氏小管、培养皿、刻度吸管或移液管、接种环、酒精灯。
(一)水样的采集
2．池水、河水或湖水 将无菌的带玻塞的小口瓶浸入距水面10～15cm深的水层中，瓶口朝上，除去瓶塞，待水流入瓶中装满后，盖好瓶塞，取出后立即进行检测，或临时存于冰箱，但不能超过24h。
l．用无菌镊子将一无菌滤膜置于滤器的承受器当中，将过滤杯装于滤膜承受器上，旋紧，使接口处能密封，将真空泵与滤器下部的抽气口连接(图26-1)。
3．用无菌镊子小心将截留有细菌的滤膜取出，平移贴于复红亚硫酸钠固体培养基上(注意无菌操作，滤膜与培养基间贴紧，无气泡)，37℃培养16～l8h。挑选深红色或紫红色、带有或不带金属光泽的菌落，或淡红色、ZX色较深的菌落进行涂片和革兰氏染色观察。
5．结果计算
（滤膜上菌落数以20～60个/片较为适宜）
1．取5支装有3倍浓乳糖蛋白胨培养基的初发酵管，每管分别加入水样10mL。另取5支装有乳糖蛋白胨培养基的初发酵管，每管分别加入水样lmL。再取5支装有乳糖蛋白胨培养基的初发酵管，每管分别加入按1：10稀释的水样lmL（即相当于原水样0.1mL），均贴好标签。此即为15管法，接种待测水样量共计55.5mL。各管摇匀后在37℃恒温箱中培养24h。
2．取出培养后的发酵管，观察管内发酵液颜色变为黄色者记录为产酸，杜氏小管内有气泡者记录为产气。将产酸产气和只产酸的两类发酵管分别划线接种于伊红美蓝培养基上，在37℃恒温箱中培养18～24h。挑选深紫黑色和紫黑色带有或不带有金属光泽的菌落、或淡紫红色和ZX色较深的菌落，将其一部分分别取样进行涂片和革兰氏染色观察。
4．根据3个梯度(10mL、1ml、0.1mL)每5支管中出现的阳性管教(即为数量指标)，查附注的“15管发酵法水中大肠菌群5次重复测数统计表”（表26-2）的细菌最可能数，再乘以100即换算成1升水样中的总大肠菌群数。
认真配制不同类型培养基。
在滤膜法中每片滤膜的菌落数以20～60个为宜。多管发酵法中水样稀释比例要适宜。
五、演示
2．在复红亚硫酸钠培养基和伊红美蓝培养基上大肠菌群典型菌落的色泽及特征的识别。
(一)实验结果记录
过滤水样量（mL）： ，37℃培养后特征菌落数： ，接种乳糖培养基后的阳性管数： 。
2．多管发酵法检测结果
（2）多管发酵法结果填于下表中：（3）多管发酵法检测结果：查表结果及总大肠菌群数（个/L）
七、问题和思考
2．试设计一个监测某自来水厂水质卫生状况的方案。
