GX转染试剂盒操作说明书

Ø 百恩维公司生产研发的GX转染试剂盒（HET）可有效地转染各种哺乳动物细胞，通常293 细胞转染率很容易达到 40-50%，优化条件后更能高达 90%以上。并且对细胞基本没有毒性。不仅可以瞬时表达，也可以筛选稳定细胞株。Ø 质粒 DNA, DNA, siRNA 等均可使用。Ø 可用于转染的细胞包括各种细胞株（如 HEK293，NIH3T3，COS7 等）和原代细胞（如成纤维细胞，成肌细胞，间充质干细胞，角质细胞，内皮细胞，上皮细胞等）。Ø 转染前以细胞融合度不超过 80%为宜。接种密度因所采用的细胞系和细胞的倍增时间而有所不同。一般而言，细胞的接种密度为 3～5 × 106 cells/100-mm 培养皿，1～2×106cells/60-mm 培养皿或 6 孔板中为 6～8 ×105 cells/孔。Ø 本试剂盒可转染六孔板细胞 1000 次，每孔成本 5 毛钱，性价比非常高。Ø 本试剂盒提供的试剂都经无菌处理，并通过严格质量检验，可以直接使用。保存条件本试剂盒可在室温（15～25℃）保存三个月，4℃保存一年，-20℃保存一年以上。包装清单产品名称 包装Buffer A 50mlBuffer B 5ml标准操作步骤1. 使用前预热试剂至常温。2. 转染前一天，接种适量细胞悬液至 100-mm 培养皿、60-mm 培养皿或 6 孔板中，放置到潮湿 37°C 5% CO2 培养箱培养过夜。3. 次日，吸去细胞培养液，加入新鲜培养液（不含青霉素-链霉素）。4. 取两根无菌 1.5ml eppendorf 管，分别记为 A、B。按下表，根据培养皿不同而加入不同体积的试剂：100-mm 培养皿（含 5ml 培养基）60-mm 培养皿（含 2.5ml 培养基）6 孔板（含 1ml 培养基）A 管：500μl Buffer A A 管：250μl Buffer A A 管：50μl Buffer AB 管：50μl Buffer B10~100μg DNA无菌水补足体系至 500μlB 管：25μl Buffer B5～50μg DNA无菌水补足体系至 250μlB 管：5μl Buffer B1～10μg DNA无菌水补足体系至 50μl5. 用移液管混匀 B 管中溶液并将 B 管中溶液轻轻逐滴加入到 A 管中。用气泡法混匀转染混合物，这一步尽量在 2 分钟内完成，室温孵育 30 分钟。6. 将混合物逐滴加入到细胞中，轻轻摇晃培养皿使混合物均匀分布在细胞表面。7. 放置到潮湿 37°C、5%CO2培养箱中培养过夜。8. 次日早上用新鲜培养基更换细胞培养液，于 37℃ 5%CO2培养箱中继续培养 24-48h。9. 检验转染效率（如荧光观察，蛋白质印迹等）。注意事项： 高纯度的质粒是获得高转染效率的必要条件，要确保 A260/A280 大于 1.8，并且电泳检测抽提到的质粒 90%以上都是超螺旋。转染时，B 管中溶液轻轻逐滴加入到 A 管中，请勿混乱顺序。 溶液的 pH 值关系到转染效率，尽量避免把转染试剂盒的溶液长时间暴露在空气中，以免被空气中的二氧化碳酸化。 转染时由于质粒不同、细胞不同，ZJ的质粒用量需自行摸索。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。