扫描电镜样品制备程序

扫描电镜样品制备程序   

一、固定：戊二醛-锇酸双固定法

   1．2.5%戊二醛（试剂1）固定4小时（或者过夜）

  2．0.1M 磷酸缓冲液（试剂2）清洗3次，每次15-30分钟

 3．1%锇酸（试剂3）固定2-4小时  4．0.1M 磷酸缓冲液（试剂2）清洗3次，每次15分钟

  二、脱水：乙醇系列

   1．30%乙醇 15－20分钟 

2．50%乙醇 15－20分钟 

3．70%乙醇 15－20分钟 

4．80％乙醇 15－20分钟 

5．90%乙醇 15－20分钟 

6．95%乙醇 15－20分钟 

7.100%乙醇 两次 每次15-20分钟  

 三、置换：  乙酸异戊酯2次，每次15分钟（或过夜）。 

 四、干燥： 临界点干燥 

 五、离子溅射金 

六、扫描电镜观察 

附注：试剂配置   试剂1：2.5%戊二醛  取0.2M磷酸氢二钠40.5mL（A液），0.2M磷酸二氢钠9.5mL（B液），混合均匀（即0.2M磷酸盐缓冲液 pH7.4），加入10mL浓度为25%的戊二醛，用超纯水稀释至100mL。   试剂2：0.1M 磷酸缓冲液 （pH 7.4） A液：0.2M磷酸氢二钠  称取3.561g Na2HPO4.2H2O（或者5.365g Na2HPO4.7H2O）; 或7.164g Na2HPO4.12H2O)，溶于100mL双蒸水中。 B液：0.2M磷酸二氢钠  称取2.760g NaH2PO4.H2O（或者3.121g NaH2PO4.2H2O），溶于100mL双蒸水中。 量取A液36.0mL, B液14.0mL，混合均匀后用双蒸水稀释至100mL，得0.1M 磷酸缓冲液（pH 7.4）。   试剂3：1%锇酸  将2%的锇酸溶液与0.1M磷酸盐缓冲溶液（pH 7.4）等体积混合，得1%锇酸。

 注意：该操作在通风橱中进行。