PCR扩增制备目的基因

1．目的
2．原理
3．器材
4．试剂
5．实验准备


待扩增的CHI片段长度：996bp。
（1）在0.2ml PCR 微量离心管中配制50μl反应体系。（以下加样量供参考，括号内是ZZ需要量，实验时需参照Taq酶说明书计算）
ddH2O 32μl
25mM MgCl2 3μl
10μmol/L Primer1 2μl（12.5~25pmoles）
模板质粒 1μl（1×10-3pmoles）
总体积 50μl
① 94℃ 5min
③ 54℃ 1min
⑤ goto② 29 times
（3）PCR结束后，取10μl产物进行琼脂糖凝胶电泳。观察胶上是否有预计的主要产物带。
（5）PCR产物可以直接与T载体连接（见实验五），然后转化感受态细胞（见实验八）。
（1）复性温度如何确定？
（3）是否有非特异性扩增产物（或引物二聚体），如何才能消除？