10×RIPA裂解液(中)(不含蛋白酶磷酸酶YZ剂)折扣价

名称：10×RIPA裂解液(中)(不含蛋白酶磷酸酶YZ剂)折扣价
品Pai：百奥莱博
编号：SY0320
英文名：10×RIPA Lysis Buffer (Medium),without enzyme inhibitors
规格：100ml
产地：国产|进口
本品属于裂解强度居中的RIPA裂解液，裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。本品为10倍浓缩液，使用时需稀释成1×工作液。

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)，其本意是Radio Immunoprecipitation Assay，是一种传统的细胞组织快速裂解液，对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有裂解作用。根据其裂解液的强度不同，大致可以分为强、中、弱三类。

注意事项
1）本品不含蛋白酶/磷酸酶YZ剂，使用前请根据实验情况添加合适酶YZ剂。
2）裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3） 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度（SY0298）。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

(一) 细胞样品
1）融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前请根据实验情况添加合适酶YZ剂。
【注】：如需加入PMSF，请在使用前数分钟内加入，使其浓度为1mM。
2）贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗细胞一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成5×105～1×106个细胞/管，然后再裂解。
3）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。

（二）组织样品：
1）把组织剪切成细小的碎片。
2）融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前请根据实验情况添加合适酶YZ剂。
【注】：如需加入PMSF，请在使用前数分钟内加入，使其浓度为1mM。
3）按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4）用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6）如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。
【注】：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期12个月。

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·溴化乙锭
编号：SY0249
英文名称：Ethidium Bromide (EB)
规格：1g
本品为粉末状EB，可配制成10mg/ml的储存液。用于电泳检测时，工作浓度为 0.5μg/ml。溴化乙锭，英文名Ethidium bromide，缩写EB，一种DNA嵌入剂，可插入DNA/RNA中，其插入双链RNA、双链DNA后荧光强度分别增强21倍、25倍，因此在低浓度（10μg/ml）染色后无需脱色，是分子生物学常用的一种核酸染料、移码诱变剂、DNA/RNA酶YZ剂。溴化乙锭已用于核酸的许多荧光分析，还可结合到单链 DNA（虽然强度不高）和三链 DNA 上。另外，EB可与吖啶橙结合用于区分存活的、凋亡和坏死的细胞。

使用方法

一、胶染法（电泳前染色）

1. 制胶时加入EB 核酸染料使其工作浓度0.5μg/ml（每50mL 琼脂糖溶液中加入2.5μL 10mg/ml EB水溶液）。
2. 按照常规方法进行电泳。

注意事项

1) 此方法比较节省染料，250 μL（10mg/ml）染料大约可以做100块 50mL的胶。
2) EB兼容所有常用的电泳缓冲溶液。
3) 胶染法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶，对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。
4) 在染料的存在下，线状双链DNA的迁移率减小了15%。

二、泡染法（电泳后染色）

1. 按照常规方法进行电泳。
2. 室温下将电泳后的凝胶在含有EtBr (0.5ug/ml)的电泳缓冲液或水中浸泡30-45min。
3. （可选）对于检测较小量DNA（＜10ng），可将EB染色后的凝胶于水或1mM MgSO4 中室温脱色20min，从而降低因未结合EB引起的背景荧光信号。

储存条件：室温，避光，有效期4年。


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