超敏感可脱色PAGE胶蛋白染色试剂盒北京厂家
- 型号:ALH378
- 产地:中国大陆
- 供应商:北京百奥莱博科技有限公司
- 供应商报价:410
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名称:超敏感可脱色PAGE胶蛋白染色试剂盒北京厂家
规格:250ml|1000ml
品Pai:百奥莱博
产地:国产|进口
英文名:PAGE protein staining kit
编号:ALH378
本试剂盒适用于快速检测PAGE胶上的微量蛋白质,它的敏感度几乎可以达到银染的敏感度(ng级水平或者更高),但是比银染简单、稳定、重复性高。染色液所含有的成份和PAGE胶中的SDS、TRIS共同作用形成特殊复合物沉淀在胶基质中形成白色的背景染色。有蛋白的地方,蛋白质的存在干扰这种复合物沉淀的形成,因此蛋白条带仍旧保持透明无色,在黑色的背景下,就可以清晰见到透明的蛋白条带。
试剂盒组份(250ml):
染色液—————————250ml
显色液—————————250ml
脱色液—————————125ml
产品特点:
1.电泳后采用两个简单步骤,15分钟内完成全部过程。
2.环保染料,完全不含有各种醋酸、甲醇等有毒有刺激性成份。
3.蛋白条带为不透明白背景上的透明条带,灵敏度为传统方法的10倍以上(纳克级或者更高)。
4.可逆染色,完全不影响蛋白性质,不影响抗体抗原结合性质。如果需要可以脱色15分钟后继续做蛋白电洗脱(切下特定条带脱色后洗脱下来可以用来做抗原生产使用)、定量、Western blot实验、质谱分析、N末端测序等。
5.在普通双蒸水中可以保留一年以上,不退色,缩小,蛋白质不扩散,一年后依然可以用来做Western blot等蛋白微分析。
操作步骤:
1. 染色
1) 电泳后用清水冲洗胶30-60 秒钟,然后将PAGE 胶放置于一个透明的玻璃培养皿中,根据胶大小倒入适量的染色液(确保胶都浸没在染色液内,20-25ml 足够染色一块普通的8×10cm mini 胶了),摇床上轻摇染色10-15 分钟(10-15%胶15 分钟,5-7.5%胶可缩短时间到10 分钟)。
2) 倒弃染色液,加入20-25ml 的显色液,立刻同时用手轻摇胶显色0.5-1 分钟(将透明培养皿放在一个黑色(暗)背景上观察条带出现情况,此时在不透明的白背景上应该看到透明的蛋白条带,不要显色时间过长,过长反而会降低分辨率)。
3) 看到满意条带后,用清水冲洗1-2 分钟后,放置于蒸馏水中保存。
2. 脱色
1) 根据个人需要将所需目的条带切下后或者直接整块胶加入适量脱色液,摇床上轻摇10 分钟或者直到脱色完全,用清水冲洗几次。
2) 现在胶可以用于蛋白电洗脱,Western blot 等操作,或者可以再用传统方法染色。
问题与解决方法
●没有见到条带可能的原因分析
1. 应该把透明培养皿放在黑色背景上看,条带为黑背景上面透明的条带。
2. 染色过头了。染色时要在暗背景上监测蛋白条带出现情况,一旦见到满意条带要立刻用蒸馏水冲洗停止染色。对于已经染色过头的胶,可以用脱色液部分脱色(胶脱色后,还可以再次反复染色)。
3. 蛋白浓度太低了,检测上样蛋白的浓度。
●干胶后,条带不见了可能的原因分析
这是一种可逆的负染色方法,干燥以后蛋白条带就和背景区分不出来了,因此不可以做成干胶。如果要长期保存,可以脱色后再用传统方法染色保存。
●染色后未脱色即直接转膜做Western blot效果不好可能的原因分析
应该脱色后才转膜做Western blot。
储存条件:室温避光,有效期12个月。
本品别名:PAGE胶微量蛋白染色试剂盒(可脱色)|可逆微量蛋白染色试剂盒|超敏感可脱色PAGE胶蛋白染色试剂盒
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