牛病毒性腹泻病毒一步法RT-PCR诊断试剂盒哪里卖

北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应牛病毒性腹泻病毒一步法RT-PCR诊断试剂盒哪里卖，产品信息：

类别：动物疫病PCR检测试剂盒

【注意】接到货后请认真阅读注意事项。

【用途】用于牛病毒性腹泻病毒病的检测、诊断和流行病学调查。

【试剂】

编号 数量 保存

SR-I 4mL 4℃

SR-II 10mL 4℃

SR-Ⅲ 14 mL 4℃

TU-1 1.5mL 4℃

TU-2 0.8 mL 4℃

TU-3 250uL -20℃

TU-4 20uL -20℃

TU-5 20uL -20℃

TU-6 20uL -20℃

TU-7 60uL -20℃

TU-8 25uL -20℃

T 500uL -20℃

【操作步骤】

1.RNA提取 

（1） 取病料组织（牛睾丸、）1~4于无菌研钵，研磨并用Hanks液或PBS稀释成1：3乳剂，分装1.5ml灭菌EP管，反复冻融2~3次，8000r/min离心5分钟。

（2）取200uL上清液（或标准品Ｔ），移入新的1.5mL灭菌EP管中，加入200uLSR-I，漩涡振荡混合均匀，静置5min。

（3）加75uL TU-1，漩涡振荡混合均匀，10000r/min离心5 min。

（4）将上清转移到新的2 ml离心管（试剂盒内提供）中，加入300 uL 异丙醇（1%冰乙酸），上下倒置6-8次，混合均匀。

（5）将步骤4中的混合液移入制备管中，并将制备管置于同一2 ml离心管，10000 r/min离心1min。

（6）弃滤液，将制备管置回到2 ml离心管中，加500 uL SR-II，室温静置1min，10000 r/min离心1 min。

（7）弃滤液，将制备管置回到2 ml离心管中，加700 uL SR-Ⅲ，10000 r/min离心1 min。

（8）将制备管置回到2 ml离心管中，10000 r/min离心1 min。

（9） 将制备管置于洁净的1.5 ml离心管中（试剂盒内提供），在制备管膜ZY加40 uL TU-2， 室温静置1 min。10000 r/min离心1 min洗脱。洗脱液即为模板，即用或-70℃冻存备用。

2.One-Step RT- PCR加样体系

TU-3 12.5uL

TU-4 1uL

TU-5 1uL

TU-6 1uL

模 板 9.5uL

 3.反应程序

第1步 50℃ 45min  

第2步

第3步 94℃预变性

94℃变性 5min

45s  

第4步 59℃退火 45s 30个循环（3～5步）

第5步 72℃延伸 45s  

第6步 72℃延伸 6min  

第7步 4℃终止 5min  

4.电泳

配制1%琼脂糖凝胶，取PCR产物5uL混合1uL TU-8，加样于凝胶孔中，同时在相邻孔加3uLTU-7，在120v 电压下，1×TAE液中电泳15分钟，在紫外成像仪下观察结果。

【结果判定】

    在约258bp位置出现扩增带，实验结果为阳性（如图）。

 1.DL2000 Marker     

 2.标准阳性片段

【注意事项】

1.每次使用，开盖之前请先瞬时离心，使试剂沉于管底。

2.本试剂盒为20头份量诊断试剂，操作失误或移液器不准确造成剂量不够情况，不予负责。

3.尽量建立PCR试验操作区，避免交叉污染，RNA抽提严格防止RNA酶污染，要求戴一次性塑料手套，并经常更换。

4.枪头、离心管和PCR管在使用前，Z好用DEPC水（0.1%）处理，然后高压灭菌后烘干，操作过程尽量不要用手接触，可用镊子夹取。

【有效期】

本制品有效期为1年，生产日期见包装侧面。

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