DL111型I型鸭病毒性肝炎一步法RT-PCR诊断试剂盒北京价格

名称：DL111型I型鸭病毒性肝炎一步法RT-PCR诊断试剂盒北京价格
编号：DL111
产地：国产|进口
品Pai：百奥莱博
规格：20次
【注意】 用前请认真阅读注意事项。
【用途】 用于鸭病毒性肝炎的检测、诊断和流行病学调查。
【试剂】
编号 数量 保存
SR-I 4mL 4℃
SR-II 10mL 4℃
SR-Ⅲ 14 mL 4℃
TU-1 1.5mL 4℃
TU-2 0.8 mL 4℃
TU-3 250uL -20℃
TU-4 20uL -20℃
TU-5 20uL -20℃
TU-6 20uL -20℃
TU-7 60uL -20℃
TU-8 25uL -20℃
T 500uL -20℃
【操作步骤】
1.RNA提取 
(1) 取疑似鸭病毒性肝炎的病料（肝脏、、淋巴结等）1~4g于无菌研钵，研磨并用PBS液（pH7.2~7.4）稀释成1：4乳剂，分装1.5ml灭菌EP管，反复冻融2~3次，8000r/min离心5分钟。（病毒培养液，只需冻融1次即可8000r/min离心5分钟）
（2）取200uL上清液（或标准品Ｔ），移入新的1.5mL灭菌EP管中，加入200uLSR-I，漩涡振荡混合均匀，静置5min。
（3）加75uL TU-1，漩涡振荡混合均匀，10000r/min离心5 min。
（4）将上清转移到新的2 ml离心管（试剂盒内提供）中，加入300 uL 异丙醇（1%冰乙酸），上下倒置6-8次，混合均匀。
（5）将步骤4中的混合液移入制备管中，并将制备管置于同一2 ml离心管，10000 r/min离心1min。
（6）弃滤液，将制备管置回到2 ml离心管中，加500 uL SR-II，室温静置1min，10000 r/min离心1 min。
（7）弃滤液，将制备管置回到2 ml离心管中，加700 uL SR-Ⅲ，10000 r/min离心1 min。
（8）将制备管置回到2 ml离心管中，10000 r/min离心1 min。
（9） 将制备管置于洁净的1.5 ml离心管中（试剂盒内提供），在制备管膜ZY加40 uL TU-2， 室温静置1 min。10000 r/min离心1 min洗脱。洗脱液即为模板，即用或-70℃冻存备用。
2.One-Step RT- PCR加样体系
TU-3 12.5uL
TU-4 1uL
TU-5 1uL
TU-6 1uL
模 板 9.5uL
3.反应程序
第1步 50℃ 45min  
第2步
第3步 94℃预变性
94℃变性 5min
30s  
第4步 50℃退火 30s 30个循环（3～5步）
第5步 72℃延伸 30s  
第6步 72℃延伸 6min  
第7步 4℃终止 5min  
4.电泳
配制1%琼脂糖凝胶，取PCR产物5uL混合1uL TU-8，加样于凝胶孔中，同时在相邻孔加3uLTU-7，在120v 电压下，1×TAE液中电泳15分钟，在紫外成像仪下观察结果。
【结果判定】
在约199bp位置出现扩增带，实验结果为阳性。
【注意事项】
1.每次使用，开盖之前请先瞬时离心，使试剂沉于管底。
2.本试剂盒为20头份量诊断试剂，操作失误或移液器不准确造成剂量不够情况，不予负责。
3.尽量建立PCR试验操作区，避免交叉污染，RNA抽提严格防止RNA酶污染，要求戴一次性塑料手套，并经常更换。
4.枪头、离心管和PCR管在使用前，Z好用DEPC水（0.1%）处理，然后高压灭菌后烘干，操作过程尽量不要用手接触，可用镊子夹取。
【有效期】
本制品有效期为1年，生产日期见包装侧面。

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