猪放线杆菌胸膜肺炎和副猪嗜血杆菌多重PCR诊断试剂盒价格厂家

北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应猪放线杆菌胸膜肺炎和副猪嗜血杆菌多重PCR诊断试剂盒价格厂家，产品信息：

类别：动物疫病PCR检测试剂盒

【注意】  用前请认真阅读注意事项。

【用途】  用于猪放线杆菌胸膜肺炎和副猪嗜血杆菌病的检测、诊断和流行病学调查。

【试剂】

编号 数量 保存

SR-I 1mL 室温

SR-II 120μl -20℃

SR-III 800μl 4℃

TU-1 110μl -20℃

TU-2 60μl -20℃

TU-3 20μl -20℃

TU-4 20μl -20℃

TU-5 1.5mL -20℃

TU-6 10μl -20℃

TU-7 35μl 4℃

TU-8 60μl 4℃

TU-9 30μl 4℃

T 1mL -20℃

【操作步骤】

1. 病料处理

   取适量病料关节液、心包积液、肺脏等组织，于灭菌研钵充分研磨，用PBS液按照1：3稀释成均匀乳剂，-20℃反复冻融3次以上。

2 . DNA的抽提

(1) 取已冻融好的病料8000r/min离心5min，取上清500μl（或质控样品T，500μl），加50μl SR-I和6μl SR-II，50℃水浴1-2h，并不时颠倒混匀一下。

(2) 加入等量酚：氯*(代＇仿＇)（1：1），漩涡振荡20s，4℃、12000r/min，离心5min。

(3) 取上清，加入等量氯*(代＇仿＇)，振荡混匀，4℃、12000r/min，离心5min。

(5) 取400μl上清，加入800μl 无水乙醇，再加40μl SR-III，混匀。-20℃放置30~60min，4℃，12000r/min，离心10min，小心弃上清，沉淀即为DNA。用75%乙醇（灭菌双蒸水配，每次加入500μl）冲洗2次，小心吸去75%乙醇，勿使DNA丢失，室温晾干或超净工作台风干15-25min，加入20μl TU-5溶解即为模板，即用或-20℃保存备用。

3.PCR操作

加样体系：(将下列试剂加入0.5mlPCR反应管中，Z好在冰浴条件下加样。)

4.电泳

   称量0.25g琼脂糖，放入锥形瓶，加入25mL 1×TAE液（可配置50×浓缩液，储存备用），于微波炉中熔解，加入1.5μl的TU-9混匀。封闭好电泳槽，加入梳子，倒入琼脂凝胶，待凝固后，将PCR产物6μl混合1.5μl TU-7，加样于凝胶孔中，同时在相邻孔加入3μlTU-8，在100v 电压下，1×TAE液中电泳30分钟，在紫外成像仪下观察结果。

【结果判定】

    在342bp（猪放线杆菌胸膜肺炎）及841bp（副猪嗜血杆菌）位置出现扩增带，实验结果为阳性。

 1.DL2000 Marker（TU-9）      

 2.标准阳性片段

[注意事项]

1. 每次使用，开盖之前请先瞬时离心，使试剂沉于管底。

2. 本试剂盒为20头份量试剂，操作失误或移液器不准确造成剂量不够情况，不予负责。

3. 所有试剂在要求温度下保存，-20℃保存试剂尽量减少反复冻融，使用后的试剂立即放回，避免在室温搁置太久。

4. 尽量建立PCR试验操作区，避免交叉污染。

5. 加样和反应程序严格按照说明书进行，由于操作失误、移液器不精确、定时不准确造成无结果情况，不予负责。

6. 吸头、离心管和PCR管在使用前，要高压灭菌，操作过程尽量不要用手接触到管内壁，可用镊子夹取。

7. 注意防止试剂污染，在有效期限前用完。

8. TU-9所装试剂为致癌物质，避免接触到皮肤。如若不甚接触，请立即用洗涤剂清洗。

[有效期]

本制品有效期为1年，生产日期见包装内侧。

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