BL21(DE3)化学感受态细胞供应

名称：BL21(DE3)化学感受态细胞供应
产地：国产|进口
规格：20×100ul
编号：RFT111
品Pai：百奥莱博
储存条件：-70℃冻存六个月
产品简介：本公司生产的BL21(DE3)感受态细胞采用经特殊工艺处理得到，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达108cfu/μg，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。
BL21(DE3)菌株介绍：特点：(1)T7 RNA 聚合酶基因的表达受控于λ 噬菌体DE3 区的lacUV5 启动子，该区整合于BL21 的染色体上。
(2)适用于T7、T7 lac 启动子的表达系统，如pET，pEASY。
(3) 适用于非毒性蛋白的表达。
(4) 使用pUC19 质粒DNA 检测，转化效率可达107 cfu/μg DNA。
操作方法：（以下操作均按无菌条件的标准进行）
1取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
以下实验以100 μl感受态细胞为例。
2 向感受态细胞悬液中加入目的DNA（50 μl的感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30分钟。
3 将离心管置于42℃水浴中放置90秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3分钟，该过程不要摇动离心管。
4 向每个离心管中加入500 μl 无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素）， 混匀后置于37℃摇床振荡培养45分钟（150转/分钟），目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5将离心管内容物混匀，吸取100 μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12-16小时。
注：涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300 μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心（4,000 rpm, 2分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板）
注意事项：1. 感受态细胞应保存在-70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免感受态细胞的转化效率。
2. 进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3. 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到。

更多有关BL21(DE3)化学感受态细胞供应的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销售以下产品：

·Taq plus DNA聚合酶
编号：RFT103
规格：500U|5×500U
GX率、高保真DNA聚合酶
● 贮存
-20℃保存一年。
● 产品简介
Taq plus DNA Polymerase是由pfu DNA Polymerase和Taq DNA聚合酶按照一定的比例混合而成，具有扩增效率高，错配率低的特点。与Taq DNA聚合酶相比，Taq plus DNA聚合酶具有扩增长度长，保真性好的优点；与pfu DNA聚合酶相比，具有扩增速度快，反应效率高的优点。此酶具有比Taq DNA聚合酶约3倍的PCR可信度。该酶的大多数PCR产物3’端带碱基A，可以通过TA克隆法进行克隆。
● 产品组成（RTS3102-02）
Taq plus DNA Polymerase（5U/μl） 100μl
10×Taq plus PCR buffer（含Mg2＋） 1ml
● 活性定义
1单位(U) Taq plus DNA Polymerase活力定义为在74℃、30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。
● 酶贮存缓冲液
50 mM Tris-HCl (pH 8.0); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50 mM KCl ; Stabilizers; 50% glycerol
● 适用范围
适用于要求保真性和GX率的PCR反应，大多数情况下可以替代Taq DNA 聚合酶。
● 使用说明：1. 按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系：成分 体积 终浓度
Template 0.1-1μg as you wish
Primer 1（10 μM） 1μl 200nM
Primer 2（10 μM） 1μl 200nM
10×Taq plus PCR buffer 5μl 1×
dNTP Mixture(10 mM) 1μl 200μM each
Taq plus(5 U/μl) 0.5-1μl 2.5-5U
ddH2O up to 50μl -
2. 混匀后，离心快甩将反应液收集到管底。
3. PCR仪如果没有热盖加热的话，补加25μl矿物油。
4. PCR仪上执行以下程序：三步法：步骤 温度 时间 循环数
初始变性 94℃ 1-5 min 1
变性 94℃ 30 sec 25-40*
退火 Tm-5℃* 30 sec
延伸 72℃ 1 min/kb
延伸 72℃ 5 min 1
*注： PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定的反应条件（温度、时间等）。


BL21(DE3)化学感受态细胞供应