大鼠结肠粘膜上皮细胞

大鼠结肠粘膜上皮细胞传代培养

细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代,再培养，传代培养也是一种将细胞保存下去的方法，同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程，悬浮型细胞直接分瓶就可以而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。

大鼠结肠粘膜上皮细胞建立和培养简介：

创建的4因子转录法进行细胞制作，原料为末梢血单核细胞，采样简单。如使用新鲜单核细胞，2周后可获得细胞克隆体（图1），4周内便可以制作出初代细胞（图2）。在培养方面，使用无滋养层培养法对细胞进行增殖培养，可在每周获得2-3倍的细胞（图3，图4）。在细胞状态稳定后，进行免疫染色测试，对细胞的未分化状态进行确定，分别对细胞进行膜染色（图5）及核染色（图6），由此得到高质量的细胞。                        

大鼠结肠粘膜上皮细胞主要服务：

1）细胞基础培养（有滋养层or无滋养层）

2）细胞增殖及冷冻保存

3）基础培养技术实习

4）新药及实验仪器上市前评估

大鼠结肠粘膜上皮细胞培养的过程中，经常见到黑色的颗粒或小黑点，这种情况是怎么引起的呢？该怎么避免呢？

                              原            因：

黑点，大概有细胞本身带的，环境有的，还有人身上带进细胞间的,还有就是血清和培养基

1、如果小黑点有增殖趋势，那么就有可能是污染了，需要处理；

2、如果小黑点没有增殖趋势，且不影响细胞生长，也不影响实验的话，则可能

  a、是“黑胶虫”，黑胶虫究竟是一种生物还是非生物，本身就存在争议。有人认为是从血清中来的一种原虫，也有人认为是细菌，或是真菌，也有人认为是血清中的蛋白的结晶。“黑胶虫”可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠细胞和培养基中的营养为生，并随大鼠结肠粘膜上皮细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长，开始时对细胞并没有什么影响，但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候， 细胞生长就会受到影响直至死亡，严重影响了科研活动的开展和进行。以前（这个至少是10年以前），很多实验室在养细胞时用国产血清，那时的血清可能质量不过关，有所谓的“黑胶虫”，但是也没有明确的鉴定。但是现在的血清，即使国产的，产品里这种现象就少见了。

 b、是细胞碎片，或血清里德沉淀析出，在做布朗运动。

 c、是核糖体，也可能是杂质

 小鼠成纤维2原代8-2/2-4，2-5ADMEM/F12+10%FBS

IPS P13 缓冻2原代12-5/2-1，2-2APSCeasy完全培养基

小鼠成纤维细胞2原代8-2/3-1，,3-2ADMEM/F12+10%FBS

Hum-16030101-韧带成纤维2原代8-2/3-3,3-4ADMEM/F12+10%FBS

Hum-16030901-成骨细胞2原代8-2/3-5，4-1ADMEM/F12+10%FBS

Hum-16030901-间充质干细胞4原代8-2/4-3~5-1ADMEM（L）+10%FBS

小鼠软骨细胞2原代8-2/5-2，5-3ADMEM/F12+10%FBS

小鼠心肌成纤维细胞2原代8-2/5-4，5-5ADMEM/F12+10%FBS

小鼠成纤维细胞2原代8-1/1-1,1-2ADMEM/F12+10%FBS

Hum-16030901-间充质干细胞2原代8-1/1-3，1-4ADMEM（L）+10%FBS

人成骨2原代8-1/1-5，2-1ADMEM/F12+10%FBS

小鼠卵巢颗粒细胞3原代8-1/2-2，2-3，2-4ADMEM/F12+10%FBS

Hum-16030101-成骨1原代8-1/2-5ADMEM/F12+10%FBS

IPS P141原代12-5/2-4APSCeasy完全培养基

IPS P143原代12-5/2-5,4-1,4-2APSCeasy完全培养基

IPS P154原代12-5/4-3~5-1APSCeasy完全培养基

Hum-16031601-成骨细胞3原代9-5/1-1，1-2,1-3ADMEM/F12+10%FBS

Hum-16031601-间充质细胞5原代8-1/4-4~5-3ADMEM（L）+10%FBS