体外微管蛋白（tubulin）结合分子检测试剂盒

 GENMED体外微管蛋白（tubulin）结合分子（binding molecules）检测试剂盒产品说明书

（中文版）

体外微管蛋白（tubulin）结合分子检测试剂盒主要用途

GENMED体外微管蛋白（tubulin）结合分子（binding molecules）检测试剂是一种旨在运用微管聚合体与目标蛋白的相互作用，通过高速离心沉淀，进而在SDS-PAGE电泳显示，来定性分析结合蛋白分子的亲和能力的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种细胞或组织裂解悬液、粗提或纯化微管相关蛋白的结合分析，以及YZ剂筛选。可以用于细胞分裂、运动、转运等的分子结构形态学研究，以及微管细胞骨架的蛋白分析。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。

体外微管蛋白（tubulin）结合分子检测试剂盒技术背景

微管（microtubules）是细胞骨架的成分之一，构成细胞浆中的基本结构网络，在有丝分裂、胞质分裂、囊泡转运方面具有重要作用。微管是微管蛋白（tubulin）的多聚体。微管蛋白分成5种亚型：α、β、γ、δ、ε。其中α和β微管蛋白（55Kd）形成异源二聚体，进而多重聚合成微管原纤维（proto-filaments）。微管由13个原纤维构成，直径为25纳米。每微米长微管由1650个异源二聚体组成。微管的装配、管束形成、和稳定取决于各种微管相关蛋白（microtubule associated protein；MAP）的活性和结合能力。基于微管聚合体与目标蛋白的相互作用，通过高速离心沉淀，进而在SDS-PAGE电泳显示，来定性分析结合蛋白分子的亲和能力，同时检测各种结合YZ剂等。 

产品内容

GENMED反应液（Reagent A）    微升

GENMED稳定液（Reagent B）    微升

GENMED结合液（Reagent C）    微升

GENMED离心液（Reagent D）    毫升

GENMED标准液（Reagent E）    微升

GENMED阳性液（Reagent F）    微升

GENMED阴性液（Reagent G）    微升

产品说明书1份

体外微管蛋白（tubulin）结合分子检测试剂盒保存方式

GENMED标准液（Reagent E）保存在－70℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里，严禁反复冻融；有效保证6月

用户自备

微管蛋白：用于结合蛋白以及YZ剂分析

1.5毫升离心管：用于样品操作的容器

微型超速离心管：用于样品离心的容器

培养箱：用于反应孵育

超速离心机：用于样品操作

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作：

1． 准备好待测的粗提或纯化蛋白样品以及微管蛋白样品，置于冰槽里待测

2． 准备3个1.5毫升离心管，分别标记为：待测样品管、阳性对照管和阴性对照管

3． 移取5微升用户自备的微管蛋白样品（100微克总量）到待测样品管

4． 分别移取xx微升GENMED标准液（Reagent E）到阳性对照管和阴性对照管里

5． 分别加入xx微升GENMED反应液（Reagent A）到所有管里，混匀

6． 放进37培养箱里孵育15分钟

7． 分别加入xx微升GENMED稳定液（Reagent B）到所有管里，混匀

8． 室温下，孵育15分钟

9． 加入5微升待测样品（总量3微克）到待测样品管

10． 加入xx微升GENMED阳性液（Reagent F）到阳性对照管里

11． 加入xx微升GENMED阴性液（Reagent G）到阴性对照管里

12． 分别加入xx微升GENMED结合液（Reagent C）到所有管里，混匀

13． 室温下，孵育30分钟

14． 移取xx微升GENMED离心液（Reagent D）到微型超速离心管里

15． 小心加入xx微升上述反应产物到GENMED离心液（Reagent D）的上面，避免震动

16． 放进4超速离心机离心30分钟，速度为100000 X g

17． 小心取出离心管，抽取上清液到新的1.5毫升离心管

18． （选择步骤）使用三氯醋酸浓缩上清液蛋白（建议使用GENMED三氯醋酸小量蛋白浓缩沉淀试剂盒-GMS30001）

19． 进行后续常规煮沸后SDS-PAGE蛋白电泳或WESTERN BLOT

20． 结果分析

体外微管蛋白（tubulin）结合分子检测试剂盒 

注意事项

1． 本产品为20次操作量

2． 试剂严禁反复冻融

3． 操作时，须戴手套

4． 用户需要另购微管蛋白

5． GENMED标准液（Reagent E）源自于猪脑微管蛋白（tubulin），分子量55KD

6． GENMED阴性液（Reagent G）源自于牛血清白蛋白（bovine serum protein；BSA），分子量66KD

7． GENMED阳性液（Reagent F）源自于牛脑微管相关蛋白2（microtubule associated protein 2；MAP2），分子量250KD

8． SDS-PAGE电泳根据蛋白分子量大小选择不同浓度；通常选择10％

9． 如果待测蛋白样品为裂解悬液，则需要做WESTERN BLOT

10． 如果检测YZ剂，则操作步骤中的待测样品改为YZ剂

11． GENMED阴性液（Reagent G）结合反应后电泳参考图像

12． GENMED阳性液（Reagent F）结合反应后电泳参考图像

13． 本公司提供系列细胞骨架检测试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定检测敏感

体外微管蛋白（tubulin）结合分子检测试剂盒订购信息

编号名称规格

GMS10274GENMED体外微管蛋白结合分子检测试剂盒20次

GMS10274A GENMED反应液（Reagent A）1毫升

GMS10274B GENMED稳定液（Reagent B）1毫升

GMS10274C GENMED结合液（Reagent C）1毫升

GMS10274D GENMED离心液（Reagent D）10毫升

GMS10274E GENMED标准液（Reagent E）100微升

GMS10274F GENMED阳性液（Reagent F）20微升

GMS10274G GENMED阴性液（Reagent G）20微升