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人蛋氨酸脑啡肽(methionine-enkephalin)ELISA试剂盒

产品信息
上海远研生物科技有限公司主营:ELISA试剂盒、细胞、标准品、抗体、生物试剂、耗材、培养基、一抗、二抗、等产品。

人蛋氨酸脑啡肽(methionine-enkephalin)elisa试剂盒
操作步骤
1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔 10 孔,在、第二孔中分别加标准品 100µl,然后在、第二孔中加标准品稀释液50µl,混匀;然后从孔、第二孔中各取 100µl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50µl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取 50µl弃掉,再各取 50µl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取 50µl 分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50µl,混匀后从第七、第八孔中分别取 50µl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液 50µl,混匀后从第九第十孔中各取 50µl弃掉。(稀释后各孔加样量都为 50µl,浓度分别为 150 pg/mL,100 pg/mL ,50 pg/mL,25pg/mL,12.5 pg/mL)。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40µl,然后再加待测样品 10µl(样品稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育 30 分钟。
4. 配液:将 30(48T的 20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的 20倍)倍稀释后备用。 
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。
7. 温育:操作同 3。
8.洗涤:操作同 5。
9.  显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15 分钟. 
10. 终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.  测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止
 

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