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再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。

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试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠脂联素（ADP）水平。用纯化的大鼠脂联素（ADP）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入脂联素（ADP），再与HRP标记的脂联素（ADP）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成的黄色。颜色的深浅和样品中的脂联素（ADP）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠脂联素（ADP）浓度。
 

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