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1.         温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

2.         配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

3.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

4.         加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

5.         温育：操作同3。

6.         洗涤：操作同5。

7.         显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

8.         终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

9.         测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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