生研血清 单增李斯特菌鼠抗分型诊断血清

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日本生研 单增李斯特菌鼠抗分型诊断血清

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11. 沉淀质粒：6000 g 4℃离心10min，轻轻吸弃废液，将质粒开盖晾置，使乙醇充分会发。（质粒中的乙醇会影响后续反应中的酶活性）
12. 溶解质粒：用300ulDDW或TE溶解步骤11中的质粒，转移到新的1.5mlEP管中，做好标记，检测浓度。
13. 柱子回收:
(1) 先用自来水冲洗柱子内外；
(2) 再用蒸馏水和DDW冲洗柱子内外，加满DDW，使其全部通过柱子，清洗2次。
(3) 向柱子中加满1 M HCl，柱子底部盖上盖子，顶部用封口膜封上，室温放置过夜。（HCl可充分降解DNA）
多位点序列分型(Multilocus sequence typing，MLST)是一种基于核酸序列测定的细菌分型方法，通过PCR扩增多个管家基因内部片段，测定其序列，分析菌株的变异，从而进行分型。MLST是由多位点酶电泳（MLEE）衍生出来的一种分型方法，由Maiden等研究设计，于1998年首先应用于自然变异是的脑膜炎奈色球菌（Neisseria meningitides），后来被广泛应用于其它病原菌、环境菌和真核生物中。
与传统分子生物学分型方法相比，MLST具有更高的分辨力，能将同种细菌分为更多的亚型，并确定不同ST型之间的系统发育关系以及与疾病的联系。MLST操作简单，结果能快速得到并且便于不同实验室的比较，已经用于多种细菌的流行病学监测和进化研究。随着测序速度的加快和成本的降低，以及分析软件的发展，MLST逐渐成为细菌的常规分型方法。MLST越来越多的被作为能进行国际间菌株比较的常用工具，建立一种更为准确的分型系统方法。MLST目前已经成为了细菌分子流行病学研究的一种重要方法，可通过数据库与其它国家和地区的研究结果进行比对，从而更加全面的认识本地区细菌流行的特征。