HUVEC-C HUVEC-C 人脐静脉内皮细胞 ATCC

注意： 应使用从牛神经组织（BD Biosciences目录＃354006或同等物）制备的高质量ECGS来繁殖CRL-1730。启动具有推荐ECGS浓度的细胞。在HUV-EC-C细胞的培养物中可常规观察到中度至重度碎片和许多漂浮细胞。通过温和离心保留漂浮细胞并添加回粘附群体。

CRL-1730是一种生长缓慢的细胞系，其粗略估计的倍增时间为5至6天。培养物应每48小时完全换液。当密度小于50％汇合时，细胞应该只允许72小时没有流体变化。执行完整的流体更改而不是添加介质。

这种细胞系产生大量漂浮物和碎片，尤其是在较高密度下。细胞在完全填充至100％汇合之前分离。建议在80％至90％汇合时对细胞进行传代培养，以避免过多的漂浮物。漂浮的细胞是可行的，如果发音，它们应该被旋转并重新植入生长的培养物中。

1. 移除并丢弃培养基。
2. 用0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53mM EDTA溶液短暂冲洗细胞层，以除去含有胰蛋白酶YZ剂的所有痕量血清。
3. 向烧瓶中加入2.0至3.0mL胰蛋白酶-EDTA溶液，并在倒置显微镜下观察细胞直至细胞层分散（通常在5至15分钟内）。
   注意：为了避免结块，在等待细胞分离时，不要通过敲击或摇动烧瓶来搅动细胞。难以分离的细胞可置于37℃以促进分散。
4. 加入6.0至8.0mL完全生长培养基，轻轻吹打吸出细胞。
5. 将适当等份的细胞悬浮液加入新培养容器中。
6. 在37°C孵育培养物。

亚培养比：建议传代培养比为1：2至1：3

中等更新：每周两到三次

接种密度：  8.0×10 3至3.0×10 4个活细胞/ cm 2

冷冻培养基：补充有5％（v / v）DMSO的完全生长培养基

储存温度：液氮气相

气氛：空气，95％; 二氧化碳（CO 2），5％

温度： 37°C