RK39检测试剂 新疆黑热病RK39检测试剂盒试纸条

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广州健仑生物科技有限公司

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本研究的目的是改造制备具有luxAB标签的重组噬菌体，并利用该噬菌体进行炭疽芽孢杆菌的检测实验。为了有助于进行遗传操作和克隆重组噬菌体，选择了γ噬菌体的父代，W?噬菌体进行研究。

一、W?噬菌体的诱导、分离和增殖

利用蜡样芽孢杆菌（B. cereus）ATCC 11950株（含有W?溶原性噬菌体）诱导W?溶原性噬菌体，增殖纯化噬菌体。

1、接种ATCC 11950单菌落到2ml BHI培养基，37℃培养16h。

2、细菌培养液涂BHI琼脂平板，并分别加入磷霉素钠盐（phosphomycin disodium salt）至终浓度为20、30和40μg/ml，37℃培养17-20h。

3、挑取中间透明区再划线接种于BHI磷霉素平板，37℃培养过夜后会形成特征性的油炸圈形菌落（donut-shaped colonies）。

4、挑取中间透明区，与SM液混匀，0.22μm滤膜过滤CJ。

5、噬菌体单斑用蜡样芽孢杆菌ATCC4342扩增培养后，保存于SM缓冲液。

二、构建luxAB表达盒

利用PCR从pQF110（ATCC77113）扩增到哈氏弧菌（Vibrio harveyi）的luxA和luxB基因，定向克隆到pBluescript-SK– (Stratagene)，启动子pro2被克隆到luxAB基因上游，转录终止子TL17被克隆到下游，从而构建出luxAB表达盒。表达盒两端有酶切位点，有利于亚克隆到大肠杆菌/芽孢杆菌穿梭质粒pHP13。