猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）核酸检测试剂盒

猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)核酸检测试剂盒方法使用及效果：
将压碎的一小片重量约在100 mg 左右的植物种子（约1/4 黄豆大小）或直径约为0.5-0.7 cm（或面积相当的其他形状）的植物叶片直接加到新鲜配制的0.1 mL溶液A 中，95℃保温10-15 分钟，加入0.1 mL 溶液B，混匀，直接取上清液（相当于PCR 体积的1/10）作为模板进行PCR。剩余样品可以放4℃保存。

样本采集、存放及运输：
1、样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
2、存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（Z多冻融3次）；
3、运输：采用泡沫箱加冰密封进行运输。
普通PCR反应流程:

自备物品：
猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)核酸检测试剂盒方法15毫升锥形离心管：用于制备样品的容器
比色皿：用于比色的容器
96孔酶标板：用于比色的容器
分光光度仪：用于比色分析
酶标仪：用于微量样品比色分析
储存条件：
14℃或－20℃
准备物品
清理液（A）                                   毫升
染色液（t B）                                   微升
稀释液（C）                                   毫升
溶解液（tD）                                   毫升
产品说明书                                   1份

硬脂酸钾分子式：322.57分子量： C18H36O2·K英文名称：Potassium stearateCAS号：593-29-3

3,5-二-1,2,4-三氮唑分子式：99.09分子量： C2H5N5英文名称：3,5- two -1,2,4- threeCAS号：1455-77-2

3-氯-5-三氟甲吡分子式：181.54分子量： C6H3ClF3N英文名称：3- -5- threeCAS号：85148-26-1

盐酸分子式：68.51分子量： ClH5N2英文名称：Hydrazine hydrochlorideCAS号：2644-70-4

4,6-二氯-5-甲嘧分子式：163分子量： C5H4Cl2N2英文名称：4,6- two -5-CAS号：4316-97-6

3,5-二叔丁溴分子式：269.22分子量： C14H21Br英文名称：3,5- tert butyl bromobenzeneCAS号：22385-77-9

辛酸硬酯酰分子式：368.64分子量： C24H48O2英文名称：Hard acid esterCAS号：59130-69-7

盐酸左咪唑分子式：240.75分子量： C11H12N2S·HCl英文名称：盐酸左咪唑CAS号：16595-80-5

2-溴-6-吡分子式：234.09分子量： C11H8BrN英文名称：2- -6- phenyl pyridineCAS号：39774-26-0

1-溴-3-(二氟甲氧)分子式：223.02分子量： C7H5BrF2O英文名称：1- -3- (two f) benzeneCAS号：262587-05-3

右旋四氢巴马汀英文名称：Right hand four MartinCAS号：3520-14-7分子式：355.42分子量： C21H25NO4

猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)核酸检测试剂盒方法Mammaglobin A  乳腺珠蛋白1抗体 0.1ml

HLA Class 1 ABC/HLAabc  人类白细胞抗原A抗体 0.1ml

Rabbit anti-mouse Kappa light chain/RBITC  罗丹明标记的兔抗小鼠k链 0.1ml

phospho-TNIK(Ser764)  磷酸化TRAF2和NCK激酶相互作用蛋白抗体 0.1ml

Collagen X  Ⅹ型胶原抗体 0.1ml

POC5  细胞ZX粒蛋白抗体 0.2ml

CACH6/Cav2.3  L型钙通道蛋白a1亚型6抗体 0.2ml

DRAK1/STK17A  丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶17A抗体（DAP凋亡诱导蛋白激酶1） 0.2ml

SERPING1/C1 Inactivator  酯酶YZ蛋白C1IN抗体 0.2ml

GSTA3  谷胱甘肽S转移酶A3抗体 0.1ml

Rabbit Anti-Monkey IgG/PE-CY5  PE-CY5标记的兔抗猴IgG 0.1ml

Goat Anti-Bovine IgG/PE-Cy3  PE-Cy3标记的羊抗牛IgG 0.1ml

反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是Z末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。