布氏冈比亚锥虫品Pai

反应五要素:
布氏冈比亚锥虫品Pai参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是Z末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。

使用及效果：
将压碎的一小片重量约在100 mg 左右的植物种子（约1/4 黄豆大小）或直径约为0.5-0.7 cm（或面积相当的其他形状）的植物叶片直接加到新鲜配制的0.1 mL溶液A 中，95℃保温10-15 分钟，加入0.1 mL 溶液B，混匀，直接取上清液（相当于PCR 体积的1/10）作为模板进行PCR。剩余样品可以放4℃保存。

样本采集、存放及运输：
1、样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
2、存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（Z多冻融3次）；
3、运输：采用泡沫箱加冰密封进行运输。
普通PCR反应流程:

自备物品：
布氏冈比亚锥虫品Pai15毫升锥形离心管：用于制备样品的容器
比色皿：用于比色的容器
96孔酶标板：用于比色的容器
分光光度仪：用于比色分析
酶标仪：用于微量样品比色分析
储存条件：
14℃或－20℃
准备物品
清理液（A）                                   毫升
染色液（t B）                                   微升
稀释液（C）                                   毫升
溶解液（tD）                                   毫升
产品说明书                                   1份

布氏冈比亚锥虫品PaiInsig2  胰岛素诱导基因2抗体 0.1ml

IKK gamma/IKBKG  KBYZ蛋白激酶γ抗体 0.2ml

AFP  甲胎蛋白抗体 0.1ml

PAS1C1  核纤层蛋白A相关结构蛋白1抗体 0.2ml

Deltex-1  DTX1抗体 0.2ml

BRN4/POU3F4  脑转录因子4蛋白抗体 0.2ml

Ubiquitin/UBC/UB  泛素蛋白抗体 0.2ml

phospho-ROCK2(Thr249)  磷酸化Rho相关蛋白激酶2抗体 0.1ml

GCS/glucosylceramide synthase  谷氨酸半胱氨酸γ合成酶抗体 0.1ml

RAMP1  受体活性修饰蛋白1抗体 0.2ml

PRPF4  PRPF4蛋白抗体 0.2ml

HIFPH4  缺氧诱导因子脯氨酰4羟化酶抗体 0.2ml