现货供应山羊抗小鼠IgG（H+L）抗血清

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金黄色葡萄球菌A蛋白(Staphylococal Protein A，SPA)是一种从金黄色葡萄球菌细胞壁分离的蛋白质。早在1940年，Vevwey发现在某些金黄色葡萄球菌中，含有一种物质，在双向扩散试验中能与正常人血清形成沉淀。Jensen也发现类似现象，并将其命名为A抗原。直到1963年Lofkvist等分离了该抗原，并证明它是一种蛋白质。

目前国内使用的大致如下:1.含A蛋白的葡萄球菌菌株

⑴ No 1800株:系ZG科学院微生物研究所保存的由上海市分离出的菌株，其SPA含量、活性及湿菌体收获量与Cowan 1株相似，且不易出现自凝现象。⑵ Cowan 1株:为SPA丰富的日本引进标准株，ZG科学院微生物研究所编号为ASI 1476⑶ 799型菌株:从化脓性骨科病人的骨标本中分离出含SPA丰富的菌株。⑷ 丹麦1972株:由丹麦引进。2.不含SPA的葡萄球菌株⑴ Wood 46株:由日本引进，编号为ASI 1477。⑵ 乙5-株:遵义医学院保存的SPA菌株。

3.用于提取纯化IgG 利用SPA与IgG的结合特性提取IgG，比常规采用硫酸铵、Sephadex柱，DEAE柱或免疫梯度离心等法要简便得多，而且纯度好。

4.检测和提纯IgM IgM在病毒的早期诊断中具有重要意义，为了检测特异性IgM抗体，必须首先在血清中除去IgG。采用SPA菌吸附IgG是目前快速而又理想的办法，利用此法也为IgM的提纯开辟了道路。

5.其它方面 用于免疫复合物的检测、体外激活补体功能试验、细胞表面标记以及肿瘤表面抗原的检测等。

6、SPA在免疫细胞化学染色中的应用

SPA可为多种示踪物如荧光素、酶、胶体金、铁蛋白等所标记，应用较广的为酶标记SPA和金标记SPA技术，后者将在第七章 中叙述。标记SPA常用的酶为HRP。可应用于间接法。SPA在PAP法中可代替桥抗体。 1.SPA-HRP用于间接法的操作步骤

金黄色葡萄球菌A蛋白(1)切片经脱蜡后用0.5%H2O2-纯甲醇液处理5min以YZ内源性过氧化物酶活性。(2)用Tris盐酸缓冲液洗2次，每次3min。

(3)以抗体血清覆盖处理切片，37℃，孵育30min，或4℃24~48h。

(4)用Tris-HCl缓冲液洗3次，每次5min。

(5)加SPA-HRP处理30min。(1)切片脱蜡至水洗。(12)脱水、透明、封固、镜检。 3.SPA-HRP的制备 应用Nakane和Kawaoi1974年建立的过碘酸法，酶:SPA=2:1，即HRP10mg，SPA5mg。

(1)10mg 溶于新鲜配制的pH8.1、0.3mol/L碳酸氢钠溶液1ml，加入0.1ml 1%二硝基氟苯无水乙醇溶液以封闭酶分子中的氨基，使不发生酶的自身聚合，室温轻轻搅拌1h。

(2)加入1ml0.04~0.08mol/L的NaIO4，室温搅拌30min。

(3)加入1ml0.16mol/L乙二醇，室温轻搅1h。

(4)对1000ml 0.01mol/L pH95 碳酸盐缓冲液充分透析，换缓冲液3次。

(5)加入5mg SPA的0.1mol/l pH7.4碳酸钠缓冲液1ml，室温轻搅2~3h。

(6)加5mg终止氧化，置4℃冰箱3h或过夜。

(7)对PBS透析24h，4℃离心去沉淀，半饱和硫酸铵洗沉淀结合物3次，溶于1ml 0.02mol/L pH7.4的PBS中。

(8)对PBS充分透析，经测定后分装，贮于-20℃冰箱中保存备用。

用过碘酸钠法可以得到很高标记率的HRP-SPA标记物，而且保存了抗体的全部活性，敏感度高，稳定性强，大大优于戊二醛标记抗体法，现在也有HRP-SPA的标记物供应，但要注意由于各家所用的SPA可能来源于不同菌株，在性质上可能存在一些差异。

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