现货供应Super Script Ⅱ阴性逆转录酶
- 产地：合肥
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现货供应Super Script Ⅱ阴性逆转录酶
RT- PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)即逆转录PCR，是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆 特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA，关键是确保RNA中无RNA酶和基因组 DNA的污染。
用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT 及基因特异性引物中的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA，三种都可。
反转录酶的选择1. Money 鼠白血病病毒(MMLV)反转录酶:有强的聚合酶活性，RNA酶H活性相对较弱。Z适作用温度为37℃。
2. 禽成髓细胞瘤病毒(AMV)反转录酶:有强的聚合酶活性和RNA酶H活性。Z适作用温度为42℃。
3.Thermus thermophilus、Thermus flavus等嗜热微生物的热稳定性反转录酶:在Mn存在下，允许高温反转录RNA，以消除RNA模板的二级结构。
4.MMLV反转录酶的RNase H突变体:商品名为SuperScript 和SuperScriptⅡ。此种酶较其它酶能多将更大部分的RNA转换成cDNA，这一特性允许从含二级结构的、低温反转录很困难的mRNA模板合成较长cDNA。
合成cDNA引物的选择1. 随机六聚体引物:当特定mRNA由于含有使反转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时，可采用随机六聚体引物这一不特异的引物来拷贝全长mRNA。用此种方法时，体系中所有RNA分子全部充当了cDNA链模板，PCR引物在扩增过程中赋予所需要的特异性。通常用此引物合成的cDNA中96%来源于rRNA。
2. Oligo(dT):是一种对mRNA特异的方法。因绝大多数真核细胞mRNA具有3'端Poly(A)尾，此引物与其配对，仅mRNA可被转录。由于Poly(A)RNA仅占总RNA的1-4%，故此种引物合成的cDNA比随机六聚体作为引物和得到的cDNA在数量和复杂性方面均要小。
3. 特异性引物:Z特异的引发方法是用含目标RNA的互补序列的寡核苷酸作为引物，若PCR反应用二种特异性引物，条链的合成可由与mRNA 3'端Z靠近的配对引物起始。用此类引物仅产生所需要的cDNA，导致更为特异的PCR扩增。
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