C57BL/6 小鼠胚胎干细胞

细胞名称

C57BL/6 小鼠胚胎干细胞

货号

CQ50002

种属

C57BL/6小鼠

细胞来源

ATCC/中科院/协和医院等地引进

生长特性

圆形克隆，贴壁

培养条件

培养基：C57BL/6小鼠胚胎干细胞完全培养液

温度：37℃     气相：95%空气，5%二氧化碳

传代

1. 小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）的复苏
2. 小鼠胚胎干细胞的复苏（以T25为例）

1. 水浴锅37°C预热，将小鼠胚胎干细胞完全培养液温浴到37°C。
2. 从液氮中取出冻存的小鼠胚胎干细胞，放入水浴锅中，快速晃动使管中的细胞尽快融化，仔细观察，待剩一块冰晶时，快速取出。
3. 用75%酒精擦拭消毒冻存管口的外表面，在超净台中打开冻存管，将细胞冻存悬液转移至含有4ml完全培养基的离心管中，注意减少气泡的产生。
4. 为了减少细胞损失，再往冻存管中加入1ml完全培养基，稍微吹打，收集至离心管中。
5. 将细胞悬液离心1000rpm/5min。离心期间，将MEF细胞换用小鼠胚胎干细胞完全培养液。
6. 离心后，去除上清，加入1ml小鼠胚胎干细胞完全培养液，，轻轻吹打混匀。
7. 将小鼠胚胎干细胞按10000-40000个活细胞/cm²的密度接种到已经换好液的MEF细胞中，轻轻摇晃培养瓶，使细胞均匀分布。放入37°C，5%CO₂的培养箱中培养。
8. 复苏后第二天，给复苏的细胞换用新鲜的小鼠胚胎干细胞完全培养基（已37°C预热）。每天换液。

1. 小鼠胚胎干细胞的传代

1. 当小鼠胚胎干细胞的克隆较大，出现分化或即将分化；或者由于复苏或传代接种的密度的问题，即将出克隆间融合，就必须传代。
2. 传代前准备，提前1-3天准备MEF细胞
3. 将小鼠胚胎干细胞完全培养基，小鼠胚胎成纤维细胞完全培养液，0.25%胰酶（含ETDA），PBS 预热至37°C。
4. 吸弃培养瓶的旧培养液，加入2ml PBS洗涤细胞，吸弃PBS，加1ml 0.25%胰酶覆盖细胞表面，消化，显微镜下观察，约70-80%左右的细胞变圆后，用手轻拍培养瓶的壁，使细胞脱落下来。
5. 立即加入1ml 小鼠胚胎成纤维细胞完全培养液，终止消化。轻轻吹打混匀。
6. 将细胞悬液转移到15ml 离心管中。1000rpm/5min。

1. 离心期间，将MEF细胞换用小鼠胚胎干细胞完全培养液。
2. 离心后，去除上清，加入1ml小鼠胚胎干细胞完全培养液，，轻轻吹打混匀。
3. 将小鼠胚胎干细胞按10000-40000个活细胞/cm²的密度接种到已经换好液的MEF细胞中，轻轻摇晃培养瓶，使细胞均匀分布。放入37°C，5%CO₂的培养箱中培养。

注意：一定要按照合适的密度进行接种，密度太稀则细胞长得慢，密度过密则容易导致胚胎干细胞的分化。