类鼻疽伯克霍尔德菌PCR检测试剂盒说明书

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

需要自备的器材：
1．仪器：分析天平、离心机、荧光 PCR 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器（2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：荧光 PCR 专用反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸二乙酯（DEPC）水
处理的灭菌离心管、吸头（10 µL、200 µL、1000 µL）、灭菌双蒸水。
普通PCR反应流程: 

储存条件：
14℃或－20℃
准备物品
清理液（A）                                   毫升
染色液（t B）                                   微升
稀释液（C）                                   毫升
溶解液（tD）                                   毫升
产品说明书                                   1份拉
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是Z末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。
类鼻疽伯克霍尔德菌PCR检测试剂盒说明书 酒假丝酵母 Candida kefyr大豆慢生根瘤 Bradyrhizobium japonicum

Trt-dU 质量>98%,BR Trt-dU

 豌豆根瘤 Rhizobium leguminosarumCOLO 205(人结肠细胞)

5'-O-三胸苷 质量>98%,BR Trt-dT

 东方伊萨酵母 Issatchenkia orientalis黄质产色链 Streptomyces xanthochromogenes

DMT保护性-2'-脱氧尿苷 质量>98%,BR DMT-2'-F-dU

 MDBK(牛肾细胞)皱褶假丝酵母 Candida rugosa

5'-DMT-5--2'-脱氧尿苷 质量>98%,BR DMT-5-I-dU

 产黄青 Penicillium chrysogenumEBTr (NBL-4) (牛胚气管细胞)

DMT保护性-2'-尿苷 质量>98%,BR DMT-2'-OMe-U

 人 B 淋巴母细胞泡盛曲 Aspergillus awamori

5’-DMT-2’-TBDMS-Bz-rC 质量>98%,BR 5’-DMT-2’-TBDMS-Bz-rC

 栖土曲 Aspergillus terricola金链 Streptomyces aureofaciens

5’-DMT-2’-TBDMS-rU 质量>98%,BR 5’-DMT-2’-TBDMS-rU

 芝 Ganoderma lucidiumYAC-1(小鼠淋巴瘤细胞)

5’-DMT-2’-TBDMS-iBu-rG 质量>98%,BR 5’-DMT-2’-TBDMS-iBu-rGNAT8 + NAT8B英文名称：Beta-lactoglobulin嗜铬粒B体

NAT8B英文名称：LPPR1血管加压激活钙启动受体蛋白1体

NOMO1英文名称：LRFN1细胞色P450Ⅱj3体

NKCC1英文名称：LRCH1钙激活离子通道4体

hydrogen exchanger 3英文名称：LRCH4周期依赖性激酶6体

phospho-NHE3(Ser552)英文名称：Leptin receptor(long)周期依赖性激酶7体

NPTX2英文名称：LIF周期依赖性激酶8体

Neprilysin 2英文名称：Lingo-1周期蛋白依赖激酶YZ因子1C体
技术原理：
 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
       在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性）
       发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。