IBD模型 MTD实验 肾脏缺血再灌注 营养性肥胖大鼠模型 转基因小...

IBD模型

1. 造模前 1d 禁食 24h 不禁水称重后，3%的腹腔注射麻醉 5%(W/V)的2，4，6-三硝基苯磺酸 （TNBS） 按 100mg/kg-150mg/kg（约等于TNBS 原液 0.4mL-0.6 mL，相当于 200 g 大鼠 20 mg-30 mg ）

2. 分别加入乙醇，体位为头朝下，用聚丙烯管插入肛门上段4cm 注射器注入

3. 再倒立1-5min左右，以防药液溢出，每隔10d重复灌肠4次后可制成病鼠模型

4. 采血前观察SD大白鼠的情况，记录大鼠外观体征、行为活动、粪便的情况，记录死亡情况，每天称重

MTD实验

1. . 动物称重并标记
2. . 计算相应给药体积：按需计算每只动物的给药量，分为高中低3个梯度，并作记录
3. . 给药操作
4. . 给药后观察：在给药时记录给药时间。连续观察至少14天，观察一般指标（如动物外观、行为、对刺激的反应、分泌物、排泄物等）、动物死亡情况（死亡时间、濒死前反应等）、动物体重变化。记录所有的死亡情况、出现的症状，以及症状起始的时间、严重程度、持续时间等

肾脏缺血再灌注

1. 购买200g的SD大鼠，饲养一周，分组

2. 根据体重注射相应剂量的水合氯醛，麻醉后进行手术

3. 打开腹腔，钝性分离肾动脉，然后用动脉夹夹闭肾脏动脉30-45min，根据实验者的设计执行

4. 然后去除动脉夹，肾脏再次流入动脉血，肾脏由紫黑重新变为鲜红色

5. 然后根据实验要求取材

成年营养性肥胖大鼠模型

1. 购买体重200g的雄性SD大鼠

2. 方法 :用高脂 高糖饲料喂养成年大鼠四至八周

3. 观察大鼠体重及Lee’s指数、腹腔内脂肪重量及脂肪系数、葡萄糖耐量、血脂、血糖及血胰岛素水平 ,

并算出胰岛素敏感性指数等

转基因小鼠筛选——鼠尾提取基因组DNA方法

   1. 小鼠分笼后打耳标，剪取小鼠尾尖3mm-5mm左右于1.5mL 离心管中，标记耳标号

   2. 配置消化液(SSTE)，每管加入消化液0.5mL，蛋白酶K 1-5 μL， 55℃，3-5h,或放置过夜。（Z长可放置3天）

   3. 加1倍体积（0.5mL）PCI(下层液体)，上下颠倒10余次。（PCI可分装出一些现用，以免操作不慎污染）

   4. 室温15000rpm离心，10min

   5. 取上清约0.4mL入新管，依次标号，加入异丙醇0.4mL ，4℃，15000rpm离心，5min

   6. 弃上清，滤纸吸干，加入70%乙醇0.5mL，将管底沉淀弹起，上下颠倒几次，洗涤

   7. 4℃，15000rpm离心，5-7min

   8. 弃上清，瞬时离心，用枪吸干剩余液体，后经空气干燥5-10min

   9. 加入1*TE 60-170μL一般加100μL，振荡30min溶解，于4℃冰箱保存