电泳级尿素100g原理

电泳级尿素100g原理产品及特点：
尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Urea PAGE)是目前分离 200 nt 以下的小片段 RNA，尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，为此天泽基因开发了本产品。它具有下列特点:
1. 一站式，含有电泳所需要的所有试剂，即开即用，十分方便，免去了实验人员称取有毒物品。
2. 灵活，可以根据需要配制各种浓度的 Urea-PAGE，以便对长度各异的 RNA 进行电泳。
3. 电泳后可直接用于 UV 观察、银染、胶回收、Northern 杂交和放射自显影等。
4. 使用新型缓冲液，可以防止甘油的干扰。
电泳级尿素100g原理产品介绍：

使用方法：
一、准备工作
1. 用固相 RNase 清除剂清洁工作的台面和器皿（详见该产品的使用手册）。
2. 配制 1 X 电泳缓冲液 将适量的 10X 电泳缓冲液用 RNase-free 水稀释 10 倍，得到 1X 电泳缓冲液待用。
3. 配制 10%过硫酸铵溶液精确称取约 100 mg 过硫酸铵到一干净的 1.5 mL 离心管中，按每 1 mg 过硫酸铵加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水，摇晃致溶，立即使用。注意：放置时间不要超过一周。
二、配制凝胶
1. 估计所需要的凝胶溶液的体积，一般配制一块 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的胶需要 15 mL 凝胶溶液，配制一块 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的胶需要 120 mL 凝胶溶液。
2. 新鲜的 40%的丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液的配制：在装有 60g 丙烯酰胺干粉的瓶中加入约 130 mL 自备的去离子水，然后将全部甲叉双丙烯酰胺加入到同一塑料瓶中（可以加少量丙烯酰胺溶液冲洗出来以避免粉末有毒粉末飘出。甲叉双丙烯酰胺溶解度低，不会溶解在这少量溶液中）。充分摇晃混匀后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是这样可以在下步留出足够空间加尿素。
3. 根据所需要的凝胶溶液的体积，在一的干净的三角瓶中按下表加入各成分。
后续处理：
1. 染色观察：将凝胶一面的玻璃板揭开，直接用仍然附着在另一玻璃板上的凝胶进行各种染色，包括银染（固定、漂洗、显影和定影等步骤）、EB（每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液）、天泽基因低毒核酸染料 DNAgreen（每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液）。 UV 下观察并拍照。
2. miRNA 回收：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下确定所需要的 miRNA 条带的位置，切胶后进行胶回收处理。
3. Northern 杂交：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下确定所需要的 miRNA 条带的位置，切胶后电转移到带正电的尼龙膜上，然后进行杂交处理。
4. 放射自显影：如果 miRNA 样品电泳前经过同位素标记，则将凝胶一面的玻璃板揭开，用滤纸将附着在另一玻璃板上的凝胶吸附过来，然后包上保鲜膜，真空抽干，然后使胶跟 X 光片向对置进行放射自显影。

lambda gtWES.lambda B'
MDH1-PGK-GFP_2.0（MDH1PGKGFP2.0）
p3xFLAG-CMV-9(p3xFLAGCMV9)
pAcHLT B(pAcHLTB)(60908-310)
pAG424GPD-ccdB-HA（pAG424GPDccdBHA）
pAS1
pBBR1-MCS2(pBBR1MCS2)(60908-691)y
pBiFC-CrN173(pBiFCCrN173)（60908-784）
pBR313
pCAMBIA1304(60908-1260)y
pcDNA3.1(-)/myc-His A
pcDNAⅠ
pCMV-Cypridina Luc
pCMV6-AC-mKate(pCMV6ACmKate)
pCP20（60908-2372）
pDC311（60908--2411）
pDsRed-Express-1(pDsRedExpress1)
pED-DsbA-pp-air（pEDDsbAppair）（60908-2571）皮状丝孢酵母 Trichosporon cutaneum
费氏中华根瘤菌 Sinorhizobium fredii
NCI-H2170(人肺鳞细胞)5×106cells/瓶×2gersion
宇佐美曲霉变种 Aspergillus usamii var.
酒假丝酵母 Candida kefyr
小鼠气管平滑肌细胞完全培养基100mL
大鼠大隐静脉内皮细胞完全培养基100mL
铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosa
中慢生华癸根瘤菌 Mesorhizobium huakuii
LS 180(人结肠腺细胞)5×106cells/瓶×2
嗜热链球菌 Streptococcus thermophilus
刺芹侧耳 Pleurotus eryngii
小鼠成纤维细胞英文名称：L929
人脑动脉血管内皮细胞完全培养基100mL
荧光假单胞菌 Pseudomonas fluorescens
枯草芽胞杆菌 Bacillus subtilis
HGC-27人胃细胞
pET-11a（pET11a）(60908-2774)
pET-41c(+)(pET41c)
pET28a-HA-CPDSalI(pET28aHACPDSalI)
pFA6a-6xGLY-3xFLAG-kanMX6（pFA6a6xGLY3xFLAGkanMX6）