基因甲基化特异性PCR扩增（MSP）试剂盒

产品编号：HL20024.2.1

名称：基因甲基化特异性PCR扩增（MSP）试剂盒 

规格：60次

价格：客服

技术背景

在基因的启动子区域（promotor region）通常存在一些富含重复双核苷酸“”的区域，称为“岛”（ island）。在人类基因组内，存在有近3万个岛。这些岛不仅是基因的一种标志，而且还参与基因表达的调控和影响染色质的结构，更是DNA甲基化的*位置。岛甲基化形态的扫描分析是基因表达和表观基因组学的主要课题。

产品内容

扩增液（Reagent A） 微升

补充液（Reagent B） 毫升

产品说明书  1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里；有效保证6月

用户自备

转化样品：经过亚硫酸盐转化的目标DNA分子

特异引物：用于甲基化基因扩增的引导DNA分子

PCR仪：用于样品扩增

PCR管或平板：用于PCR反应的容器

实验步骤

实验开始前，从－20℃冰箱中取出试剂，放进冰槽里融化。然后进行下列操作：

• 针对一个样本，每次移出xx微升扩增液（Reagent A）到PCR管
• 加入1微升用户自备的的转化或野生型DNA样品（总量100纳克）
• 分别加入1微升用户自备的甲基化特异性的引物F和引物R（各350纳克或25微摩尔）
• 再加入xx微升补充液（Reagent B）（反应总量为25微升）
• 即刻放进微型台式离心机瞬时离心5秒，速度为500g（或2000RPM；例如eppendorf 5415）
• 加入50微升PCR级矿物油（注意：参见注意事项10）
• 即刻进行热启动PCR反应：

• 反应完毕后，移取5微升进行1.8%琼脂糖凝胶电泳或15%聚丙烯酰胺凝胶
• 如果进行测序鉴定，胶回收PCR产物（建议使用高质纯化一步法胶回收试剂盒；HL20051.1） 
• 分别移出2微升反应液到2个不同的新的1.5毫升离心管（每微升100纳克）
• 加入1微升用户自备的甲基化特异性的巢式引物F（每微升350纳克）到其中一个1.5毫升离心管，作好标记
• 加入1微升用户自备的甲基化特异性的巢式引物R（每微升350纳克）到另一个1.5毫升离心管，作好标记
• 进行后续的直接测序反应

注意事项

• 本产品为60次操作
• 操作时，须戴手套
• 建议使用带滤芯的枪头，避免污染
• 转化后的DNA样本须保存在－20℃冰箱里，否则容易降解；同时尽快进行扩增等后续操作
• 一个特定基因的甲基化检测通常包括转化、PCR和直接测序三步。PCR用于筛选和定位，可以发现0.1%甲基化；测序是精确定位，是分析金标准
• 一个特定基因的甲基化特异性PCR通常包括三组PCR： 
• 甲基化特异性PCR的引物设计原则：引物以SENSE的DNA链为模板；引物含有足够多的C（后面不和G相连）；引物含有1－3个位点；位点须在3端；PCR片段长度在80－250碱基；三组引物取自同一位点，通过长度变化获得相同的Tm，并在电泳上有所区别。
• 直接测序的引物设计原则是：引物不能含有位点；引物含有足够多的C（不和G相连）；采用巢式引物
• 基因甲基化区域选择原则：如果是一个首次检测的基因，首先，选择启动子部位；第二，选择足够多的位点；第三、 
• 通过1.8%琼脂糖凝胶或15%聚丙烯酰胺凝胶电泳来检测PCR扩增后的结果。假如DNA样品在修饰前是未甲基化的，那么仅仅“U”Primers将产生扩增产物；相反，已甲基化的DNA样品仅仅用“M”Primer能被扩增

• 组织样品或杂合子样品常常出现“U”和“M”同时呈现阳性；建议使用基因甲基化程度定量分析试剂盒（HL20024.3）予以分析
• 根据用户PCR仪的性能，决定是否加入矿物油（Mineral Oil）
• 建议使用软件测算Tm温度；在－20℃冰箱里储存的产品避免反复冻融
• 本公司提供甲基化特异性引物设计服务
• 本公司同时提供数字化表观基因组完全分析（全部甲基化基因）技术试剂盒和外包服务（HL90002）
• 本公司提供系列甲基化分析试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定转化保证
• 本产品经鉴定无核酶污染
• 本产品经鉴定反应产量高