斯氏李斯特氏菌培养

资源名称:斯氏李斯特氏菌培养

种属: Listeria seeligeri
安全等级     1
模式菌株     no
应用领域     研究、质量控制
培养方法     
培养基     脑心浸液琼脂（BHIA）：牛脑浸粉 4.0g，牛心浸粉 4.0g，蛋白胨 5.0g，酪蛋白胨16.0g，NaCl 5.0g，葡萄糖 2.0g，磷酸氢二钠 2.5g，琼脂 20.0g，pH7.4 ± 0.2。121℃，15min。
生长条件     37℃，好氧

斯氏李斯特氏菌培养注意事项：
1.  取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。
2.  冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜（DMSO）对细胞不是完全，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作 较大，因此，必须在1-2min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜（DMSO）Z好选择进口产品。
3.  离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。
4.  离心问题：目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。因为离心的目的是两个，去除 DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大， 死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜（DMSO），DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液 体前倒净，且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无有异常。
5.  细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时1ml细胞液要加10ml－15m培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。
6.  复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。
7.  加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题是DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响 细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于0.5%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是1％。所以如果你的冻存液的浓度是 10％DMSO的话那么加10ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。

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检测方法： 
1．将病人标本和/或液状对照品放至室温（15-30℃），轻轻混匀。测试前从包装袋中取出检测卡平放。
2．将1根Binax样本拭子浸入要测试的标本中，完全浸没拭子头。如果拭子有滴水，将拭子靠在收集容器的边上，排去多余的液体。
3．检测卡内部的右手边有两个孔，将拭子插入底部的孔中（拭子孔），稳步向前推，使整个拭子头在上部的孔中可见，不要取出拭子。
4．垂直持放A试剂瓶，高出检测卡上方1/2到1英寸，慢慢向底部的孔中加入3滴A试剂。
5．立即从检测卡的右缘揭去粘附衬，封闭检测卡，过15分钟在窗口判读结果。15分钟后读取的结果可能不准确。然而，有些阳性病人不到15分钟就出现可见样品线。牛蒡子苷元分子式：372.41分子量：C21H24O6英文名称：NiubangziGanYuanCAS号：7770-78-7
十一分子式：186.29分子量：C11H22O2英文名称：ElevenacidCAS号：112-37-8
假荆芥属苷分子式：478分子量：C22H22O12英文名称：NepetaglycosideCAS号：569-90-4
颜料红4分子式：327.72分子量：C16H10ClN3O3英文名称：Pigmentred4CAS号：2814-77-9
10-硝喜树碱分子式：393.3496分子量：C20H15N3O6英文名称：10-nitrogroupCAS号：104195-61-1
泛昔洛韦分子式：321.33分子量：C14H19N5O4英文名称：FamciclovirCAS号：104227-87-4
头孢噻呋盐盐分子式：560.02分子量：C19H18ClN5O7S3英文名称：CeftiofurhydrochlorideCAS号：103980-44-5
亮绿SF淡黄分子式：792.85分子量：C37H34N2O9S3Na2英文名称：LightgreenSFCAS号：5141-20-8
2,2-双二羟甲胺(Bis-tris)分子式：209.24分子量：C8H19NO5英文名称：2,2-doubledimethylolaniline(Bis-tris)CAS号：6976-37-0
1-二十八烷分子式：410.75952分子量：C28H58O英文名称：1-twenty-eightalkylalcoholCAS号：67905-27-5
2-萘酚-6,8-二磺酸二钾英文名称：Two-6,8-two2-naphtholsulfonicacidpotassiumCAS号：842-18-2分子式：380.48分子量：C10H6K2O7S2
1-丁-3-甲咪唑鎓三溴物英文名称：1-butyl-3-methylimidazoliumbromidethreeCAS号：820965-08-0分子式：378.93分子量：C8H15Br3N2SF767(人脑瘤细胞)5×106cells/瓶×2
NCI-H1688(人典型小细胞肺细胞)5×106cells/瓶×2
NC膜(0.22um)30cm × 3m，15cm x 20cm30cm × 3m，15cm x 20cmgersion
A2(人腺样囊性细胞)5×106cells/瓶×2
LS 180(人结肠腺细胞)5×106cells/瓶×2
HSC-T6(大鼠肝星形细胞)5×106cells/瓶×2
HCT116/人结肠细胞株国产
植物蛋白提取试剂（带酶YZ剂）100次国产
Calu-3(人肺腺细胞)5×106cells/瓶×2
人关节软骨细胞完全培养基100mL