Protein A+G Sepharose Beads，现货

产品简介：

本Protein A+G Sepharose主要用于免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）、免疫共沉淀（Co-IP）或者抗体的纯化。

Protein A+G Sepharose适合于免疫沉淀所有Protein A Sepharose和Protein G Sepharose 单独可以免疫沉淀的抗体，包括：mouse IgG1，IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA,；rat IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG2c； rabbit、goat、pig 、cow,、sheep、horse以及human IgG1, IgG2, IgG3和IgG4等。

本产品为50%的悬液，1 ml Protein A+G Sepharose可结合约25 mg human IgG。

产品优势：

• 适用范围广：适用于各种抗体的免疫沉淀或者纯化
• 背景低：改造的protein A/G，极低的非特异性吸附
• 重复性好：同样实验条件下，保障实验结果的可重复性

贮藏条件：

常温运输； 4℃保存，两年有效。

使用方法：

1. 免疫沉淀（Immunoprecipitation,IP）：
   1. 蛋白样品的准备：
      • 取10cm细胞培养皿中的贴壁细胞，吸除细胞培养液，PBS洗涤两次，然后加入500微升至2毫升细胞裂解液裂解细胞（如RIPA）；
      • 对于组织样品，参考贴壁细胞使用裂解液的比例进行裂解；
      • 取悬浮细胞，离心收集细胞后，PBS洗涤一次，然后参考贴壁细胞的裂解方法进行裂解。

      ☆ 注意：a） 具体的裂解方法，应参考不同裂解液的详细使用方法；b）不同量的细胞，应选用适当裂解液的用量进行裂解（如果裂解获得的蛋白样品浓度过高，可以用裂解液或PBS适当稀释，如果蛋白样品浓度过低，在以后的裂解过程中宜适当减少裂解液的用量）。

      ★ 推荐：建议在细胞处理时加入全能核酸酶Benzonase Nuclease（货号RPE002），降低背景，保障实验的可重复性。

   2. 去除非特异性结合（可选做）：
      1. 取0.2-1mL蛋白样品，蛋白量约为0.2-1mg，加入约1ug和免疫沉淀时使用的IgG 种属相同的普通IgG和20uL充分重悬的Protein A+G Sepharose，4℃缓慢摇动30分钟至2小时。
      2. 2500rpm（约1000g）离心5分钟，取上清用于后续的免疫沉淀。

      ☆ 注意：所谓种属相同的IgG是指，假如后续免疫沉淀时用的是小鼠IgG，则在本步骤中可以加入normal mouse IgG，如无normal IgG可以加入其它不影响后续检测的其它mouse IgG类型的抗体。通过和 normal IgG和Protein A+G Sepharose的孵育，可以充分降低非特异性的结合，降低背景。

   3. 免疫沉淀：
      1. 加入0.5-2ug 用于免疫沉淀的一抗，4℃缓慢摇动过夜。
      2. 再加入10-20uL充分重悬的Protein A+G Sepharose，4℃缓慢摇动1-3个小时。

         ☆ 注意：10-20uL Protein A+G Sepharose，即20-40uL50%充分重悬的Protein A+G Sepharose。

      3. 2500rpm（约1000g）离心5分钟，或瞬时高速离心，小心吸除上清。

         ☆ 注意：宁可残留少量上清，也不能吸掉Protein A+G Sepharose。

      4. 用准备蛋白样品时的裂解液或PBS洗涤沉淀5次，裂解液或PBS的用量每次为0.5-1毫升。洗涤时离心条件和吸除上清的要求同上面的步骤C。
      5. 完成Z后一次洗涤后，去除上清，加入20-50uL 1xSDS-PAGE电泳上样缓冲液，震荡重悬沉淀，瞬时高速离心把样品离心至管底。
      6. 沸水浴处理3-5分钟，取部分或全部样品用于SDS-PAGE电泳，暂时不用的样品可以-20℃保存。
2. 免疫共沉淀：

   参考1中免疫沉淀的方法进行，但免疫共沉淀（Co-IP）通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品，但推荐用新鲜的蛋白样品为佳。

   ★ 推荐：建议在细胞裂解时加入全能核酸酶Benzonase Nuclease（货号RPE002），降低背景，保障实验的可重复性。

注意事项：

1. 请勿冷冻保存本产品；
2. Protein A+G Sepharose 使用前一定要充分颠倒若干次，使Sepharose混合均匀。
3. 所有步骤中，蛋白样品都需要在4℃或冰上操作。

包装规格：

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