A549细胞,人肺癌细胞

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细胞在运输、转移过程中，请勿打开自封袋；拿放细胞时请持瓶体，切勿在非无菌环境中碰触、拧动瓶口封口膜位置

进入生物安全柜前，打开自封袋拿出培养瓶，喷上酒精放进操作台(不建议使用酒精棉球擦拭)，撕开封口膜后，用酒精灯外焰对瓶口烧灼一圈(3秒左右)

细胞冻存如下：

1．细胞：选对数生长期细胞，收集细胞24小时前换液一次。

2．计数：按常规方法把细胞制成细胞悬液，计数，令细胞密度达5×106/ml，离心去上清，吸入离心管中。

3．冻存液：先用培养液9分＋DMSO 1分(或甘油)配成10％的DMSO冻存液，按上法一滴滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。

4．分装：分装入无菌安剖中，每安剖加1.5毫升细胞悬液。

5．封口：用塑料安剖时拧紧瓶口即可；如用火焰封闭安剖口后，仔细检查，定要封严，必要时可浸入蓝色液中观察，为安全起见，把安剖缝入纱布小袋中，以防液氮浸入后，融解时因受热发生爆炸伤人；纱袋一端系以线绳，末端扎有小Pai，注明：细胞名称，冻存日期，以便日后查找。

竖立培养瓶，拧开瓶盖(如是贴壁细胞，请用真空泵或吸管移除原配培养基，切勿让瓶口处的液体回流进瓶内)

更换为含10%-20%血清的完全培养基，严格按照无菌操作要求继续培养

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