BC2570 糖代谢系列试剂盒α-半乳糖苷酶（α-GAL）测试盒

糖代谢系列试剂盒α-半乳糖苷酶（α-GAL）测试盒
货号：BC2560
规格：50管/24样
测试方法：可见分光光度法

测定意义                      
    α-GAL (EC 3.2.1.22)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能专一地催化α半乳糖苷键的水解，主要参与棉子糖、水苏糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。α-GAL对于植物种子的萌发至关重要，种子萌发初期，其催化产生的D-半乳糖通过糖酵解途径迅速转化和消耗，为种子的萌发提供初的能量来源，后期则主要参与细胞壁储藏多糖水解。

测定原理
    α-GAL分解对-硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算α-GAL活性。

自备用品
    可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入5mL双蒸水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存。

试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体80mL×1瓶，4℃保存。

标准液：液体1ml×1支，4℃保存，10μmol/ml对硝基苯酚溶液。

粗酶液提取：

1、细菌或培养细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每400万细菌或细胞加入400μL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次），15000g，4℃，离心20分钟，取上清，置冰上待测。

2、组织的处理：称取约0.2g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；15000g，4℃，离心20min，取上清，置冰上待测。

3、标准液的处理：用试剂二将标准液稀释至200、100、50、25、12.5、6.25、0nmol/ml.

测定步骤和加样表（在1.5mLEP管中依次加入下列试剂）：

迅速混匀，放入37℃准确水浴30min

充分混匀，室温静置2min后， 400nm处测定吸光值A。△A=A测定管-A对照管

α-GAL活性计算：

根据标准管的吸光度（x）和浓度（y，nmol/ml）建立标准曲线，将△A带入标准曲线中，计算样品生成的产物量（nmol/ml）。

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg 组织蛋白每小时产生1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

α-GAL 活力(nmol/h /mg prot)=(y×V 反总)÷(V 样×Cpr)÷T=20×y÷Cpr

需要另外测定，建议使用本公司BCA 蛋白质含量测定试剂盒。

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每g 组织每小时产生1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

α-GAL 活力(nmol/h /g 鲜重)＝(y×V 反总)÷(W×V 样÷V 样总)÷T=20×y ÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每1 万个细菌或细胞每小时产生1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

α-GAL 活力(nmol/h /104 cell)= (y×V 反总)÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.04×y

Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；V 反总：反应体系总体积，0.5mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g； 500：细胞或细菌总数，500 万；T：反应时间，0.5h。

糖代谢系列试剂盒α-半乳糖苷酶（α-GAL）测试盒订购说明：

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糖代谢系列试剂盒α-半乳糖苷酶（α-GAL）测试盒运输说明：

1、极低温产品：极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来，再用泡沫盒密封，胶带层层粘住泡沫盒，放入索莱宝专用的箱子，然后交付给合作快递，安全快速GX放心的送至客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
2、低温产品：低温产品运输过程中加装索莱宝专用冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来，再使用泡沫盒密封，用胶带严实密封泡沫盒，再放入索莱宝专用的箱子（保温效果少可以持续一周），然后交付给合作快递，安全快速GX放心的送至客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
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