蛋白提取和SDS-Page凝胶电泳试剂盒 齐一现货供应

蛋白提取和SDS-Page凝胶电泳试剂盒 

产品简介

蛋白提取和SDS-PAGE凝胶电泳试剂盒包含了蛋白提取试剂及SDS－PAGE凝胶电泳所需的试剂。其中包括RIPA裂解液，BCA蛋白定量试剂，5×蛋白上样buffer，预染的蛋白Marker和 SDS-PAGE凝胶电泳试剂。

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。 RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的主要成分为50mM Tris (pH 7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种YZ剂。可以有效YZ蛋白降解。

BCA蛋白浓度测定试剂Z常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。BCA法测定蛋白浓度灵敏度高，检测浓度下限达到25μg/ml，Z小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1-20μl。在50-2000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。

SDS-PAGE凝胶配制试剂提供了配制SDS-PAGE凝胶所需的各种试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制PAGE胶了。SDS-PAGE凝胶配制试剂盒不仅可用于配制SDS-PAGE凝胶，也可用于配制非变性(native)PAGE凝胶。本试剂盒约可配制25块常规大小的PAGE胶(即聚丙烯酰胺凝胶)。

应用方面：可用于Western Blotting中的蛋白提取和电泳的全过程。

试剂盒以外自备仪器和试剂

手术剪，玻璃匀浆器，细胞刮，摇床，eppendorf管，涡旋振荡器，微型高速冷冻离心机，分光光度计或酶标仪，酶标板，电泳装置，1.5m L离心管，100mMPMSF，冰冷PBS，去离子水

保存条件：

RIPA裂解液（强），5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液，预染蛋白分子量 Marker（14.4-116KD）-20℃保存

蛋白标准溶液-20℃保存，BCA试剂A和BCA试剂B室温保存。

1M Tris-HCl, pH8.8、10% SDS、Ammonnium persulfate (过硫酸铵)和1M Tris-HCl, pH6.8室温或4℃保存。30% Acr-Bis (29:1)和TEMED 4℃避光保存。

过硫酸铵配制成10%溶液后（0.5g中加入4.5ml蒸馏水溶解），分装成小管-20℃保存，通常半年内有效。

蛋白提取和SDS-Page凝胶电泳试剂盒 

    操作规程

（1）用RIPA裂解液提取蛋白

注意事项：

1、   为取得Z佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

2、   需自备PMSF。

3、   裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

4、   有的样本要通过一些预实验来摸索Z佳的适合您实验条件的裂解液。

5、   一般常规提取的蛋白样品，进行后续试验不需要透析，但如果需要较大量的提取蛋白或后续试验结果不理想，则需要将提取的蛋白样品进行透析脱盐，建议使用透析液透析后进行后续分析。

6、   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

(一)        对于细胞

1、   RIPA裂解液（强）工作液的准备

 在每mL 冷RIPA裂解液（强）加入10μL 100mM PMSF混匀。冰上保存数分钟待用。

2、   样品的处理

A、  悬浮细胞

a、    离心（2000rpm，5min）收集细胞，尽Z大努力吸尽上清。

b、  用PBS洗一遍，离心（2000rpm，5min）吸尽上清，留下细胞沉淀备用。

c、    转入第3步进行操作。

B、  贴壁细胞

a、    培养好的细胞吸去培养基后，加入10mL冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液。

b、   用细胞刮子刮下细胞，或用EDTA溶液（不含胰酶）处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打下细胞。

c、    将细胞溶液转至新的冰冷离心管中，离心（2000rpm，5min）吸尽上清。

d、  用PBS洗一遍，离心（2000rpm，5min）吸尽上清，留下细胞沉淀备用。

e、    转入第3步进行操作。

蛋白提取和SDS-Page凝胶电泳试剂盒 

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蛋白提取和SDS-Page凝胶电泳试剂盒 

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