分子生物学：荧光定量PCR实验技术服务

分子生物学：荧光定量PCR实验技术服务

荧光定量PCR分类：
一、TaqMan荧光探针
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5‘-3‘外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成同步。

分子生物学：荧光定量PCR实验技术服务
二、SYBR Green荧光染料
SYBR Green是一种DNA结合染料，能非特异地掺入到双链DNA中去。在游离状态下，它不发出荧光，但一旦结合到双链DNA中以后，便可以发出荧光。它的大优点就是可以与引物、模板相配合，用于反应体系中。从经济角度考虑，它也比其它的探针的价格要便宜得多。但由于它能与的双链DNA结合，所以一旦反应体系中出现非特异扩增，那它就会影响到定量结果的可靠性与重复性。要避免这种不利因素，可以通过选择良好的引物并优化反应条件以消除非特异性影响。

RT-qPCR主要实验步骤，是由三个步骤组成:
1.反转录:依赖反转录酶将RNA反转录成cDNDA;
2.扩增:用PCR的方法扩增cDNA;
3.检测:实时检测和定量扩增的产物.

荧光定量PCR中的一些术语：
1. CT值：荧光信号有统计意义显著增长(即穿过阈值线)时的循环次数，或者说是从基线到指数增长的拐点所对应的循环次数。
2. 阈值：阈值的默认设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。
3. CT值与起始模板的量成线性关系。

客户需知：
1、请您提供新鲜的且尽量多的材料，或直接提供纯化好的总RNA或DNA（大于5ug/样本）。如是如织：100-200mg
2、请提供详细背景资料：DNA/RNA来源，丰度。

结果提供：
1、实验详细步骤，和相关数据。
2、标准曲线，扩增曲线，溶解曲线。
3、完整的实验报告（含软件分析结果）