人硫胺素（Thiamine）ELISA试剂盒

人硫胺素（Thiamine）ELISA试剂盒测定错误结果的原因分析

ELISA即酶联免疫吸附试验，是一种常用的固相酶免疫测定方法。Engvall 和Perlmann于1971年Z先应用该法进行了IgG定量测定，并命名为"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"。 ELISA的基本原理是：

①使抗原（或抗体）结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；

②使抗原（或抗体）与某种酶联结成酶标抗原（或抗体），而且此酶标抗原（或抗体）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；

③测定时将受检标本（抗体或抗原）和酶标抗原（或抗体）按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应，再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开，Z后结合在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比例；再加入酶反应底物后，底物被酶催化后变为有色产物，根据其颜色反应的深浅进行定性或定量分析，以了解被测标本中抗体或抗原含量。

人硫胺素（Thiamine）ELISA试剂盒添加回收的几种误区：

    呋喃类代谢物提取过程通常分三个关键步骤：

 水解-----衍生化-----提取

 (1)采用标准曲线的Z大标准浓度进行添加回收。如德国拜发和我公司AOZ试剂盒中的第6个标准点4.05ppb，AMOZ试剂盒中的第6个标准点8.1ppb。因为这些标准品是已经过衍生化后的标准品，不能代表样本前处理实验中的加酸水解和加衍生化试剂衍生这两个步骤，所以就算回收率很高，但失去了实际参考价值。

 （2）完全依赖未衍生的代谢物标准品进行添加回收。因部分未衍生的代谢物在配制成标准品后有一定的有效期，会存在潜在的不稳定因素，而且添加回收仅能考证衍生化和提取两个关键点，不能验证从组织蛋白中水解呋喃类代谢物的过程，因此也有一定的局限性。

 Z好的评价方案：采用经LC-MS-MS确证的阴阳性样品，留作质控样品，对检测的样本和试剂盒进行质量评价。这也是实验室所出数据可信度Z具说服力的关键点。

加样

 在中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。

  加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定（如间接法ELISA）需用稀释的血清，可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液，再在其中加入血清标本，然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。

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