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H7N9双色荧光定量检测试剂盒

产品信息
上海义森生物科技有限公司
禽流感病毒H7N9（2013）核酸测定试剂盒（荧光PCR法）
Avian influenza virus （H7N9） Real Time RT-PCR Kit
【产品名称】
通用名称：禽流感病毒H7N9（2013）核酸测定试剂盒（荧光PCR法）
英文名称：Avian influenza virus （H7N9） Real Time RT-PCR Kit
【包装规格】 25人份／盒
【预期用途】通过对样本中禽流感病毒H7基因和N9基因的特异性RNA核酸片段分别进行定性检测，可用于临床对可疑感染患者的病原学鉴别诊断。
【检验原理】本试剂盒采用聚合酶链式反应（PCR）技术结合荧光探针技术，对禽流感H7N9特异性核酸片段进行荧光PCR检测。
【试剂盒主要组成成份】

 

序号
组分
数量
体积／人份
1
H7N9核酸荧光PCR检测混合液
480?l×1
19?l
2
RT-PCR酶
28?l×1
1?l
3
DEPC-H2O
400?l×1
4
阳性对照品
30?l×1

 

 
说明：不同批号的组分不可以互换使用。
自备试剂：Trizol；氯仿；75%乙醇；异丙醇或磁珠法RNA提取试剂；本公司可以代为订购或提供销售商。
【储存条件和有效期】 试剂盒应在－20℃及以下温度避光保存，有效期12个月。采用冰盒行运输；荧光PCR检测混合液反复冻融不宜超过3次。
【适用仪器】 本试剂盒适用于ABI7000，ABI7300，ABI7500，ABI7900，MJ-chromo4，MX3000P，MX3005P，SmartCyclerⅡ，Rotor-Gene6000，Lightcycler R480，iCycleriQ4，iCycleriQ5，Bio-Rad CFX96，SLAN等多色荧光PCR仪及相应软件。
【标本要求】
人体鼻腔或咽部分泌物:用无菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物，将分泌物或咽拭子置入无菌玻璃管（含0.4ml灭菌生理盐水），用无菌棉球将试管塞紧后，密闭送检。标本可立即用于检测，也可保存于-20℃待测。【检验方法】
1.标本、对照品的核酸裂解处理
用商品化（取得YL器械许可证）的RNA提取试剂盒处理标本，具体操作参见该试剂盒说明书。
或用Trizol法提取，方法如下：取100?l样品置于1.5ml 离心管中，加入300?l裂解液（Trizol），再加入100?l氯仿， 混匀器上振荡混匀5sec或颠倒混匀15次； 13000rpm离心15min， 吸取上层液体，加入等体积异丙醇，颠倒混匀室温静置10min， 13000rpm离心10min，轻轻倒去上清；加入700?l 75%乙醇，颠倒洗涤，13000rpm离心5min，轻轻倒去上清，倒置于吸水纸上，弃尽液体或4000rpm离心5sec，将管壁上的残余液体甩到管底部，用微量加样器尽量吸干液体，加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.试剂配制
取n×19?l H7N9核酸荧光PCR检测混合液与n×1?l RT-PCR酶（n为反应管数）,振荡混匀数秒, 3000rpm离心数秒。
3.加样取上述混合液20?l置于PCR管中，然后将样品核酸提取液、DEPC-H2O、阳性对照品各5?l分别加入PCR管中，盖好管盖，立即进行PCR扩增反应。
4. PCR扩增反应管置于定量荧光PCR仪上，推荐循环参数设置：
45℃×10min; 95℃×15min;循环一次，再按95℃×15sec→60℃×60sec，循环45次;单点荧光检测在60℃，反应体系为25?l。
荧光通道检测选择：选用FAM通道。
备注：如使用ABI系列PCR仪，请务必于passive reference 和 quencher处均选择“none”。
5. 阈值设定
阈值设定原则以阈值线刚好超过DEPC-H2O的Z高点。
6. 质量控制：试剂盒各对照品须达到以下要求，否则实验视为无效。

 

Ct值
FAM通道（检测H7）
HEX/VIC/JOE（检测N9）
DEPC-H2O
UNDET或45
UNDET或45
阳性对照品
≤35
≤35

 

 
7. 试验结果的判断

 

通道
Ct值
结果判断
1
FAM+HEX
UNDET或45
样本低于检测限，报告为阴性
2
FAM+HEX
≤43
FAM通道为H7基因阳性；
HEX/VIC/JOE通道为N9基因阳性
3
FAM+HEX
43～45
复检一次,如仍为43～45,则报告为阴性

 

 
进行定量检测时，仪器生成标准曲线后，自动显示待检样品定量值。
【参考值范围】阴性（检测对象H7N9为病原微生物，在健康人体中不存在）。
【对检验结果的解释】实验室环境污染，试剂污染，样品交叉污染会出现假阳性结果；试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果。
【检验方法的局限性】当检测样本中被检核酸浓度含量低于Z低检测限5×103copies/ml时可能会发生假阴性的结果。
【产品性能指标】Z低检测限：1×103copies/ml；
【注意事项】 开始检测前请仔细阅读本说明书全文。
1. 整个检测过程应严格分在三区进行：PCR反应体系的配制区；标本处理、加样区；PCR扩增、荧光检测及结果分析区。各区使用的仪器、设备、耗材和工作服应独立专用。实验后即请清洁工作台，并进行消毒。
2. 使用不含荧光物质的一次性手套（经常替换） 、一次性专用离心管、自卸式移液器和带滤嘴吸头。
3. 试剂准备和标本处理应使用超净工作台（负压式）或防污染罩，以防止对环境污染。
4. 每次实验应设置阴、阳性对照品。
5. 操作人员应经过专业培训，具有一定经验和操作技能。
6. 操作台、移液器、离心机、PCR扩增仪等仪器设备应经常用10%次氯酸或75%酒精、紫外线灯或臭氧消毒处理。
7. 实验中接触过标准品和对照品的废弃物品（如吸头）、扩增完毕的离心管、标本等应进行无害化处理后方可丢弃。
8. 试剂使用前应在常温下充分融化并混匀。
9. PCR反应混合液应避光保存。
10. 反应管中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧。
11. 不同批号的试剂请勿混用，请在有效期内使用试剂盒。

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信息声明：本产品供应信息由仪器网为您整合，供应商为（凯学生物科技（上海）有限公司），内容包括 （H7N9双色荧光定量检测试剂盒）的品牌、型号、技术参数、详细介绍等；如果您想了解更多关于 （H7N9双色荧光定量检测试剂盒）的信息，请直接联系供应商，给供应商留言！
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