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3-磷酸甘油酸激酶(PGK)测试盒(微量法)说明

产品信息
  • 细胞生物学研究有以下几个方面。
    细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
    ①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
    ②生物膜与细胞器的研究。
    ③细胞骨架体系的研究。
    ④细胞增殖及其调控。
    ⑤细胞分化及其调控。
    ⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
    ⑦细胞的起源与进化。
    ⑧细胞工程。
    产品名称：3-磷酸甘油酸激酶(PGK)测试盒(微量法)说明
    英文名称：
    产品规格：100管/96样
    发货周期：1～3天
    测定意义:
    3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的关键酶，广泛存在于动植物和微生物体内，催化1，3-二磷酸甘油酸转变为3-磷酸甘油酸，产生1分子ATP，具有影响DNA复制和修补及刺激病毒RNA合成等生物学功能，广泛应用于药物靶标设计。
    测定原理：
    3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP产生1,3-二磷酸甘油酸和ADP，1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脱氢酶和NADH作用下产生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸，340nm处的吸光度变化反映了3-磷酸甘油

    使用方法:
    1. 悬浮细胞，2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎，造成假阳性，过短，细胞黏连影响检测)Z好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶消化液，加入细胞培养液终止消化，2000rpm离心5min收集细胞。
    2. 4℃预冷PBS，洗涤细胞2次（2000rpm x 5min）,收集细胞2～5×105 。
    3. 离心弃上清，加入500μL结合缓冲液，轻轻吹打重悬细胞。
    4. 加入5μL Annexin V-FITC，轻轻吹打混匀，加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许，可以在检测前5分钟加入PI)
    5. 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。Z好在1h内检测。
    注意事项：
    3-磷酸甘油酸激酶(PGK)测试盒(微量法)说明尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
          如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
          染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
          如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
          荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
          用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
          需自备PBS。
          本产品于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或ZL，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
          为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
    细胞培养的优点：
    1.研究的对象是活细胞
    在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
    2.研究条件可以人为控制
    pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
    3.研究的样本可以达到比较均一性
    通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
    4.研究内容便于观察、检测和记录
    采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
    Erucin （10 mg）     1isothiocyanato4（methylthio）butane； Erucin
    Ivabradine （hydrochloride） （250 mg）     S 257； 3[3[[[（7S）3,4dimethoxybicyclo[4.2.0]octa1,3,5trien7yl]methyl]methylamino]propyl]1,3,4,5tetrahydro7,8dimethoxy2H3benzazepin2one, monohydrochloride
    MES缓冲液（100GM）     MES Buffer， CAS 44323； ≥99%
    Vatalanib （hydrochloride） （10 mg）     N（4chlorophenyl）4（4pyridinylmethyl）1phthalazinamine， dihydrochloride； CGP 7|PTK/ZK； Vatalanib （hydrochloride）
    Staurosporine （500 ug）     2，3，10，11，，hexahydro10Rmethoxy9Smethyl11Rmethylamino9S，Repoxy1H，9Hdiindolo[1，2，3gh； 3’，2’，1’lm]pyrrolo[3，4j][1，7]benzodiazonin1one； Stsp； Staurosporine
    3[（1R）1（2，6dichloro3fluorophenyl）ethoxy]5（1piperidin4ylpyrazol4yl）pyridin2amine     Crizotinib
    盐酸环胞苷100克
    (荧光染料)
    洋槐豆胶，英文名或英文缩写：Locust bean gum，级别：CP，70%，规格：1克
    拂硼醋铵 cmmonium fluoborctq 830
    本基二录化膦 Dichlorophqnylphosphinq 64
    1Bromoheptane5克超，99.9%
    0叔丁醇;第三丁醇;基;2甲基2tertButanol;2metxyl2propanol;tertButyl alcohol
    BOCLLeucinepOCL白酸10克BR，99%
    植酸钙 Phytin 325 25G 通用试剂
    一三 Tribromofluoromethane,≥99.0% 3535 5ML 通用试剂
    Malt Extract 麦芽浸膏 500g  incubation media Malt Extract 麦芽浸膏 500g
    Yeast Extract 酵母浸膏 500g  incubation media Yeast Extract 酵母浸膏 500g
    HYLB-s 培养基 5s  incubation media HYLB-s 培养基 5s
    Peptone 140 (Soytone) 蛋白胨-140 100g  incubation media Peptone 140 (Soytone) 蛋白胨-
    3-磷酸甘油酸激酶(PGK)测试盒(微量法)说明酸性肉汤250g用于酸性缺罐头食品商业无菌检验
    Fraser培养基 Fraser Medium 用于李氏菌的增菌培养
    产芽孢肉汤 Sporulation Broth 250克 产气荚膜梭菌的产芽孢培养
    TBX培养基l用于快速、准确检测大肠杆菌大肠杆菌培养24小时，显兰色incubationmediaTBX培养基l用于快速、准确检测大肠杆菌大肠杆菌培养24小时，显兰色
    MEIMedium
    培养操作：
    1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
    2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      
    1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
    2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
    3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
    4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
    3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
    1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
    2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
    3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.

     
    温馨提示：不可用于临床ZL。
    • 信息声明：本产品供应信息由仪器网为您整合，供应商为（上海邦景实业有限公司），内容包括 （3-磷酸甘油酸激酶(PGK)测试盒(微量法)说明）的品牌、型号、技术参数、详细介绍等；如果您想了解更多关于 （3-磷酸甘油酸激酶(PGK)测试盒(微量法)说明）的信息，请直接联系供应商，给供应商留言！
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