可视化UNG-LAMP试剂盒(可视化防污染LAMP试剂盒）

可视化UNG-LAMP试剂盒(可视化防污染LAMP试剂盒）是本公司可视化 LAMP 试剂盒的升级版，它有下列特点：
1. 防污染,在 2×可视化 LAMP MagicMix 中整合了 dUTP-UNG 防污染系统，
解决了 LAMP 扩增非常容易污染的这个棘手问题。
2. 可视化，整合了本公司的 A 型 LAMP 可见光染料，不需要任何仪器即可肉
眼判断是否有扩增。
3. 使用改良的 Bst DNA 聚合酶，使本产品既可用 DNA 为模板于 LAMP 扩增，
也可用 RNA 模板进行 UT-LAMP 扩增。DNA 聚合酶只有在 40℃以上时扩
增才启动，反应特异性更强。
4. 扩增效率更高，扩增效率可达到上亿倍，比 PCR 灵敏一个数量级，可检测
到单拷贝的 DNA 分子。
5. 本试剂盒足够 50 次 20uL 体系的可视化 UNG-LAMP 和 UNG-RT-LAMP
扩增。
6. 本试剂只能用于科研，不能用于临床。
规格及成分 成 份 编 号 塑料袋包装
2×可视化 UNG-LAMP MagicMix 180703a 500 uL
使用手册 180703sc 1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂 LAMP 模板、RT-LAMP 模板及 LAMP 引物
使用方法 1. 配制自备的5×LAMP引物混合液：先加超纯水（不要用TE）将各引物干粉
稀释到下表所列母液浓度，然后在一新的离心管中按表中所列加入量加入各
种引物母液和自备超纯水，得到1mL的5×LAMP引物混合液。如果不
使用Loop引物，其体积由水填充如果需要配制的5×LAMP引物混合液体积
大于或小于1mL，则各成分的用量请按比例调整。此混合液可以在-20℃放
置2年。
引物名称 母液浓度 加入量 在混合液中终于浓度
FIP 引物 100 uM 80 uL 8 uM
BIP 引物 100 uM 80 uL 8 uM
F3 引物 100 uM 10 uL 1 uM
B3 引物 100 uM 10 uL 1 uM
Loop F 100 uM 20 uL 2 uM
Loop B 100 uM 20 uL 2 uM
自备超纯水 780 uL
2. 在新的反应管中设置UNG-LAMP或UNG-RT-LAMP反应：
成份 样品管 阴性对照 1 阴性对照 2
2×可视化 UNG-LAMP Mix 10 uL 10 uL 10 uL
自备 5×LAMP 引物混合液 4 uL 4 uL -
自备模板 DNA 或 RNA 1-100ng - 1-100ng
补超纯水到 20 uL 20 uL 20 uL
3. 混匀，此时反应液呈现非常浅的绿色，由于是否有反应是跟阴性对照和反应
前对比，所以一定要设置阴性对照，并且反应前要手机照相留存以供反应后
比对。
4. 置于25℃5分钟（让UNG灭活可能的LAMP的污染），然后放63℃扩增
60-120分钟（如果不使用Loop引物，则Z好保温2小时）。如果是在PCR
仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，必须在孔中加水以
填充孔和管子间的空隙，并且在管中加50uL石蜡油，否则保温期间反应体
系的水分会蒸发，影响反应效率）。
5. 80℃10分钟灭活Bst DNA聚合酶和UNG酶。
6. 如果有阳性扩增，则反应液将变成绿色，如果没有阳性扩增，反应液将还是
浅绿色。标准的反应结果如下图（左边1个为阴性，右边2个为阳性）：
7. 如果需要电泳确认，则取扩增产物5 uL直接在2%的琼脂糖凝胶电泳（不需
要再加上样液），可见LAMP特征性电泳图谱。一般不简易在开盖，这正式
产生污染的原因。
注意事项
1. 引物设计对 LAMP 成功扩增十分关键，尽量以保守区设计引物。
2. 引物至少包括 F3/B3 和 FIP/BIP，加入环状引物 F loop/B loop 可
以使反应速度大大提高。
3. 应优化引物序列、GC 含量和尽量避免二级结构。
4. 要确证扩增的为目标基因，可以选择有特定的限制性酶切位点的靶分子
或者在引物中的连接区加上限制性内切酶的识别位点，扩增结束后再用
此其对应的限制性内切酶去酶切。如果能切开，则很可能是所选的靶分
子。如果不能，则可能是非特异扩增或引物自扩。
关联产品 Bst DNA 聚合酶(CAT#:100209)