人肺癌细胞/5Fu耐药株哪家好

实验材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml灭菌烧杯2个； 人皮肤成纤维细胞,CCC-HSF-1细胞
3、50ml离心筒2个 
4、灭菌培养皿1个，细胞培养瓶1个 
5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 
6、细胞计数板1块； 
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 
8、酒精灯1台；

产品名称	人肺癌细胞/5Fu耐药株哪家好
种属	A549-5Fu
价格	来电可享受优惠

资源名称 人肺癌细胞/5Fu耐药株
种属:A549-5Fu
形态:上皮样
培养方法
培养基:McCoy＇sMedia(ModifiedwithTricine)10%FBS　
生长特性:贴壁生长

收到细胞后，在倒置镜下(4X物镜)观察整个细胞生长情况：
（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。
(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。
人肺癌细胞/5Fu耐药株哪家好具体步骤如下：
1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。
实验报告：
一、分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

 
注意事项：
1. 整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作。 
2. 反应完毕后请尽快检测，反应1 小时后荧光强度就开始衰变。 
3. Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物质，在操作时请注意避光。 
4. 试验操作过程中佩戴手套等防护用品。 
5. 试验开始前将一定量的 10×Annexin V Binding Buffer 用超纯水（1:9）稀释至 1×备用。
盐甜菜标准品  规格:200mg  英文名称：Betaine Hydrochloride
克沙标准品  规格:100mg  英文名称：Ioxaglic Acid
噻嗪标准品  规格:200mg  英文名称：Chlorothiazide
双氢噻嗪标准品  规格:200mg  英文名称：Hydrochlorothiazide
依莰舒相关物质A标准品  规格:50mg  英文名称：Ecamsule Related Compound A
标准品  规格:200mg  英文名称：Lindane
木糖标准品  规格:1g  英文名称：Xylose
生物素标准品  规格:200mg  英文名称：Biotin
酒石布托诺啡诺标准品  规格:500mg  英文名称：Butorphanol Tartrate CIV
扁桃乌标准品  规格:200mg  英文名称：Methenamine Mandelate
L异白氨  特价促销  英文名称:LIsoleucine  含量:BR，99%
L异亮氨甲酯盐盐  特价促销  英文名称:HIleOMe.HCl  含量:特纯，98.0%
L异木糖  特价促销  英文名称:L(+)Lyxose  含量:专业级，70%
L正白氨  特价促销  英文名称:LNorleucine  含量:BR，99%
L组氨甲酯二氫物  特价促销  英文名称:LHistidinemethylesterdihydrochloride  含量:BR，98%
MAYER氏粘液素卡红  特价促销  英文名称:Mucicarmine  含量:高纯，96%
MMLV逆转录酶  特价促销  英文名称:MMLVReversetranscriptase  含量:USP级，1000u/mg
N(1甲基乙基)2酰  特价促销  英文名称:NIPAM  含量:CP，2040目
N(2氨基)亚氨基二醋  特价促销  英文名称:ADA  含量:络合指示剂
N(2基)亚氨基二乙二盐  特价促销  英文名称:ADA2Na  含量:AR，99%
人肺癌细胞/5Fu耐药株哪家好产品规格：10ml|50ml
发货周期：1～3天
用途：
通过TTC染色，检测花粉活力，也可以测定种子的生活力，不过染色时间稍长。
注意事项：
TTC是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，还原后生成红色不溶于水的三本甲腙，进而判断花粉活力。
储存条件：4℃，避光，6个月