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细胞壁不溶性酸性转化酶(B-AI)测试盒(可见分光光度法)说明书

产品信息
  • 【细胞冻存】
    待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
    中文名称：细胞壁不溶性酸性转化酶(B-AI)测试盒(可见分光光度法)说明书
    英文名称：详见说明书
    产品规格：50管/24样
    发货周期：1～3天
    发货周期：1～3天
    测定意义:
    蔗糖转化酶(Invertase，Ivr)催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据Z适 pH，Ivr分为酸性转化酶(AI)和中性转化酶(NI)两种类型。
    AI的Z适pH为3～5。AI分为可溶性AI(S-AI)和细胞壁不溶性AI(B-AI)两种类型。B-AI存在于细胞间隙并结合在细胞壁上，主要参与韧皮部质外体卸载时蔗糖的分解，以维持库源之间蔗糖的浓度。
    测定原理：
    B-AI催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在510nm有特征光吸收，在一定范围内510nm光吸收增加速率与B-AI活性成正比。

    自备用品:
    可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移器、微量石英比色皿/96孔板
    【培养指南】
    对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
    1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
    2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
    3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
    4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
    【复苏的原则】
    产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
    细胞的种类：
    种：
    是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的Z好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
    第二种：
    是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
    质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，进口来源，保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
    细胞培养操作规程：
    一．培养基及培养冻存条件准备：
    1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
    2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
    3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
    二．细胞处理：
    1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
    2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
    对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
    方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
    Mycobacterium malmoenes尔摩分枝杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒Phospho-Stat2 (Tyr690)TBRG4甘肽受体3抗体
    Mycobacterium malmoenes尔摩分枝杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒phospho-STAT3 (Ser727)TYK3脑肠肽受体抗体
    Mycobacterium marinum海鱼分枝杆菌PCR试剂盒Phospho-Stat4 (Tyr693)phospho-TYK3(Tyr402)GRC5蛋白抗体
    Mycobacterium marinum海鱼分枝杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒Phospho-Stathmin (Ser16)TRPM1肠和大脑特定同源蛋白1抗体
    Mycobacterium marinum海鱼分枝杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒Phospho-Stathmin(Ser38)TRPM6生长分化因子6抗体
    N-Nonanoyl-N-methylglucamine规格：>98%,BRS6PDHTMEM22L鸟嘌呤核苷酸交换因子GEFT抗体
    N-Nitrosodiethylamine规格：分析标准品Bid (BH3 interacting domain death agonist)英文名称ZFP57组蛋白H1抗体
    N'-Nitro-L-arginine-methylesterhydrochloride规格：>98%PACAP(6-38 Peptide)英文名称ZNF717组蛋白去酰化酶1抗体
    N'-Nitro-D-arginine规格：0.98PACAP/VIP receptor英文名称ZDHHC7HAUS3蛋白抗体
    N-N-Dimethylglycinehydrochloride规格：>99%,BRAR，40%98%500mlGHbA1cGlabridinAnti-RAMP-1受体活性修饰蛋白1抗体Anti-RAMP-1受体活性修饰蛋白1抗体48T/96TPACAP receptor-I英文名称ZNF3热休克蛋白93抗体
    细胞壁不溶性酸性转化酶(B-AI)测试盒(可见分光光度法)说明书carbonhydrate antigen 72-4(R)-(-)-N,N-二基...
    cancer antigen 27-29(S)-(+)-N,N-二基...
    paraoxonase 3(1R,2R)-二[(2-氧...
    Ubiquitin-specific protease 三特基四硼酸盐
    Gamma-secretase subunit APH-1A三（2-氧基基）膦
    Lassa feve Virus IgG antibody三烯膦
    Secreted phosphoprotein 2三基
    LALP四硼酸三正基
    Argininosuccinate Synthetase 1三环己基膦四硼酸盐
    Ornithine decarboxylase 1三异叉基膦
    操作步骤(仅供参考)：
    1、细胞壁不溶性酸性转化酶(B-AI)测试盒(可见分光光度法)说明书贴壁细胞的消化
    ①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
    ②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
    ③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
    化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的  完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
    ④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
    ⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
    2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。

     
    温馨提示：不可用于临床ZL。
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