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抗坏血酸氧化酶(AAO)测试盒(紫外分光光度法)说明书

产品信息
  • 【细胞冻存】
    待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
    中文名称：抗坏血酸氧化酶(AAO)测试盒(紫外分光光度法)说明书
    英文名称：详见说明书
    产品规格：50管/48样
    发货周期：1～3天
    发货周期：1～3天
    测定意义:
    AAO是定位于植物细胞壁的糖蛋白，属“蓝铜氧化酶”家族。细胞壁内的抗坏血酸和AAO与细胞壁的代谢和生长有着密切的联系。AAO 氧化 AsA 所形成的 MDHA 可通过质膜上的细胞色素b还原，该过程有电子的跨膜运输从而促进细胞生长。
    测定原理：
    AAO可直接氧化AsA，通过测定AsA的氧化量，可计算得AAO活力。
    实验中所需仪器及设备：

    研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1ml石英比色皿、可调式移液器、双蒸水
    【培养指南】
    对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
    1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
    2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
    3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
    4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
    【复苏的原则】
    产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
    细胞的种类：
    种：
    是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的Z好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
    第二种：
    是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
    质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，进口来源，保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
    细胞培养操作规程：
    一．培养基及培养冻存条件准备：
    1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
    2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
    3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
    二．细胞处理：
    1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
    2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
    对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
    方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
    Francisella tularensis土拉热弗朗西斯菌PCR试剂盒E2F4SET三羟基三基辅酶A合成酶1
    Francisella tularensis土拉热弗朗西斯菌染料法荧光定量PCR试剂盒E2F6SET热休克因子1抗体
    Francisella tularensis土拉热弗朗西斯菌探针法荧光定量PCR试剂盒E2 tagStyk1酸化热休克因子1抗体
    Fusarium equiseti木贼镰刀菌PCR试剂盒EAAT3(Excitatory amino acid transporters 3)SCN11A热休克蛋白71抗体
    Fusarium equiseti木贼镰刀菌染料法荧光定量PCR试剂盒EBNA-3 (Epstein barr nuclear antigens 3)SCN1B微丝相关蛋白hHBrk1抗体
    Physalaemin规格：>95%,BRSERPINB11英文名称TSHRG蛋白偶联受体71抗体
    p-Hydroxybenzoicacidpropylestersodiumsalt规格：>98.5%,USPSERPINB3英文名称TSHR (CT)谷氨酸受体δ2/GluR-δ2抗体
    p-Hydroxybenzoicacidmethylestersodiumsalt规格：>99%,BRSNF1LK2英文名称Phospho-TAK1(Thr184 + Thr187)血型糖蛋白A/涎糖蛋白抗体
    p-Hydroxybenzoicacidethylestersodiumsalt规格：>98.5%,BRSeptin 3英文名称Phospho-TBK1 (Ser172)谷氨酸脱羧酶67抗体
    p-Hydroxybenzoicacidbutylestersodiumsalt规格：>98%,USPpig cholerae salmonella英文名称Tuberin生长YZDNA损伤基因45抗体
    抗坏血酸氧化酶(AAO)测试盒(紫外分光光度法)说明书peroxiredoxin 22,4-二硝基
    Actin-related protein 2/3 complex subunit 32--4-硝基
    Transketolase五氯硝基
    C4 Binding Protein Alpha对溴
    Proteasome Subunit Beta Type 5仲基
    S100A122,4-二氯硝基
    Follistatin Like Protein 11,2-二基
    Seizure 6-like protein异基
    Complement 1q receptor4-异基
    ubiquitin C-terminal hydrolase 421,4-双[2-(2-基...
    操作步骤(仅供参考)：
    1、抗坏血酸氧化酶(AAO)测试盒(紫外分光光度法)说明书贴壁细胞的消化
    ①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
    ②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
    ③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
    化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的  完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
    ④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
    ⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
    2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。

     
    温馨提示：不可用于临床ZL。
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