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NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒(微量法)哪家好

产品信息
  • 培养操作步骤:
    1.NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒(微量法)哪家好用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布; 
    2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片); 
    3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时; 
    4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中; 
    5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 

    中文名称:NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)测试盒(微量法)哪家好
    英文名称:NAD-malate dehydrogenase detection kit
    产品规格:100管/96样
    发货周期:1~3天
    发货周期:1~3天

    测定意义:
    MDH (EC 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。
    测定原理:
    MDH催化NADH还原草酰乙酸生成苹果酸,导致340nm处光吸收下降。
    需自备的仪器和用品:

    紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 mL石英比色皿和蒸馏水。
    实验报告:
    一、分离与培养:
        1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将组织剪成1mm3左右大小;
        2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
        3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
        4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
        5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
    二、免疫荧光鉴定:
        1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%在室温条件下固定细胞15min;
        2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
        3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
        4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
        5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
        6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
    注意事项:
          尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,但为取得良好的使用效果,3-6个月内推荐4℃保存,并适当注意避免反复冻融。
          如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。
          染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
          如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC,导致染色失败。
          荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
          用于流式细胞仪检测时,如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且通过调整相关设置和参数也无法改善,可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测,这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
          需自备PBS。
          本产品于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或ZL,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
          为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
    以下是公司正在产品:
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    温馨提示:不可用于临床ZL。
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